病毒学报
病毒學報
병독학보
CHINESE JOURNAL OF VIROLOGY
2003年
4期
336-341
,共6页
刘相冬%张宝山%王滨有%杨威%孙成群%周家喜%王凯波%孔宪刚
劉相鼕%張寶山%王濱有%楊威%孫成群%週傢喜%王凱波%孔憲剛
류상동%장보산%왕빈유%양위%손성군%주가희%왕개파%공헌강
马传染性贫血病毒%mRNA拼接效率%拼接信号%Rev
馬傳染性貧血病毒%mRNA拼接效率%拼接信號%Rev
마전염성빈혈병독%mRNA병접효솔%병접신호%Rev
分别以马传染性贫血(马传贫)驴强毒(D-A EIAV)RNA和马传贫驴白细胞弱毒疫苗(DLA EIAV)RNA为模板,利用RT-PC R的方法,克隆到马传贫强、弱毒株基因组外显子-2及其下游的核苷酸序列 .然后将报告基因CAT插入到EIAV内含子2 env阅读框架中,构成 CAT拼接报告系统.同时在强毒株重组表达质粒的基础上,将其外显子-3 上游拼接受体位点的核苷酸序列CAG突变为弱毒株相应位置的核苷酸序列T AG,得到强毒单核苷酸突变株重组表达质粒.用构建的3个重组表达质粒D NA转染驴血白细胞,ELISA检测转染细胞CAT浓度.结果表明:EI AV强毒株重组表达质粒中CAT蛋白表达量最高,EIAV强毒株重组表达质粒次之,EIAV强毒突变株重组表达质粒最低.由于CAT基因被插入于各重组质粒中的EIAV内含子-2里,EIAV外显子-2、3之间的拼接可导致该基因的删除,因而其拼接效率低于EIAV mRNA外显子-2、 3之间的拼接效率.实验数据表明,EIAV SA2拼接信号序列单碱基变异提高了SD2-SA2拼接效率;D-A EIAV SA2-SD2拼接效率比DLA EIAV相应位点拼接效率高.
分彆以馬傳染性貧血(馬傳貧)驢彊毒(D-A EIAV)RNA和馬傳貧驢白細胞弱毒疫苗(DLA EIAV)RNA為模闆,利用RT-PC R的方法,剋隆到馬傳貧彊、弱毒株基因組外顯子-2及其下遊的覈苷痠序列 .然後將報告基因CAT插入到EIAV內含子2 env閱讀框架中,構成 CAT拼接報告繫統.同時在彊毒株重組錶達質粒的基礎上,將其外顯子-3 上遊拼接受體位點的覈苷痠序列CAG突變為弱毒株相應位置的覈苷痠序列T AG,得到彊毒單覈苷痠突變株重組錶達質粒.用構建的3箇重組錶達質粒D NA轉染驢血白細胞,ELISA檢測轉染細胞CAT濃度.結果錶明:EI AV彊毒株重組錶達質粒中CAT蛋白錶達量最高,EIAV彊毒株重組錶達質粒次之,EIAV彊毒突變株重組錶達質粒最低.由于CAT基因被插入于各重組質粒中的EIAV內含子-2裏,EIAV外顯子-2、3之間的拼接可導緻該基因的刪除,因而其拼接效率低于EIAV mRNA外顯子-2、 3之間的拼接效率.實驗數據錶明,EIAV SA2拼接信號序列單堿基變異提高瞭SD2-SA2拼接效率;D-A EIAV SA2-SD2拼接效率比DLA EIAV相應位點拼接效率高.
분별이마전염성빈혈(마전빈)려강독(D-A EIAV)RNA화마전빈려백세포약독역묘(DLA EIAV)RNA위모판,이용RT-PC R적방법,극륭도마전빈강、약독주기인조외현자-2급기하유적핵감산서렬 .연후장보고기인CAT삽입도EIAV내함자2 env열독광가중,구성 CAT병접보고계통.동시재강독주중조표체질립적기출상,장기외현자-3 상유병접수체위점적핵감산서렬CAG돌변위약독주상응위치적핵감산서렬T AG,득도강독단핵감산돌변주중조표체질립.용구건적3개중조표체질립D NA전염려혈백세포,ELISA검측전염세포CAT농도.결과표명:EI AV강독주중조표체질립중CAT단백표체량최고,EIAV강독주중조표체질립차지,EIAV강독돌변주중조표체질립최저.유우CAT기인피삽입우각중조질립중적EIAV내함자-2리,EIAV외현자-2、3지간적병접가도치해기인적산제,인이기병접효솔저우EIAV mRNA외현자-2、 3지간적병접효솔.실험수거표명,EIAV SA2병접신호서렬단감기변이제고료SD2-SA2병접효솔;D-A EIAV SA2-SD2병접효솔비DLA EIAV상응위점병접효솔고.
