CAJ | 학술논문

目的:构建人La蛋白(human La protein,hLa)突变体表达质粒,并在大肠杆菌中表达野生型La蛋白及各突变体.方法:利用定点突变技术,对野生型人La蛋白的原核表达质粒pET28b-hLa进行定向缺失突变,将得到的3个突变体Mu1(A366)、Del1(A235～276)、Del2(A119～150)分别克隆至pET28b中,获得野生型人La蛋白突变体的表达质粒,并在BL21(DE3)和Rosetta2两种不同宿主菌中和不同浓度的IPTG诱导条件下进行蛋白表达水平的比较.结果:所获得的人La蛋白突变体的基因编码序列经测序符合序列设计的要求,表达产物经SDS-PAGE分析可见,在相对分子质量47 000处出现一明显条带,与预期的相对分子质量一致.结论:三个位点的序列改变并没有明显影响hLa蛋白的表达,在补充密码子的宿主菌Rosetta2中的表达量优于宿主菌BL21(DE3).
목적:구건인La단백(human La protein,hLa)돌변체표체질립,병재대장간균중표체야생형La단백급각돌변체.방법:이용정점돌변기술,대야생형인La단백적원핵표체질립pET28b-hLa진행정향결실돌변,장득도적3개돌변체Mu1(A366)、Del1(A235～276)、Del2(A119～150)분별극륭지pET28b중,획득야생형인La단백돌변체적표체질립,병재BL21(DE3)화Rosetta2량충불동숙주균중화불동농도적IPTG유도조건하진행단백표체수평적비교.결과:소획득적인La단백돌변체적기인편마서렬경측서부합서렬설계적요구,표체산물경SDS-PAGE분석가견,재상대분자질량47 000처출현일명현조대,여예기적상대분자질량일치.결론:삼개위점적서렬개변병몰유명현영향hLa단백적표체,재보충밀마자적숙주균Rosetta2중적표체량우우숙주균BL21(DE3).