世界华人消化杂志
世界華人消化雜誌
세계화인소화잡지
WORLD CHINESE JOURNAL OF DIGESTOLOGY
2009年
15期
1489-1492
,共4页
STIM1%真核表达载体%人肝细胞株HL-7702%基因表达进行验证
STIM1%真覈錶達載體%人肝細胞株HL-7702%基因錶達進行驗證
STIM1%진핵표체재체%인간세포주HL-7702%기인표체진행험증
目的: 构建人STIM1基因真核表达载体, 并观察其在人肝细胞株(HL-7702)中的表达.方法: 提取HL-7702细胞总RNA, RT-PCR扩增,经纯化回收后将片段克隆至pGM-T载体, 酶切琼脂糖凝胶电泳分析鉴定并测序, 最后用重组质粒转染HL-7702细胞, 通过PCR-电泳和Western blot法检测STIM1基因的表达.结果: PCR扩增的片段长度为342 bp, 测序结果以及重组质粒pGM-T-STIM1的酶切琼脂糖凝胶电泳鉴定结果均证明STIM1基因成功克隆到真核表达载体中. PCR-电泳和Westernb l o t实验结果分别显示转染重组质粒后的HL-7702细胞在基因与蛋白水平表达STIM1均有所增强.结论: 成功构建了人STIM1基因的真核表达载体pGM-T-STIM1, 并在人肝细胞株HL-7702中稳定表达, 为研究STIM1蛋白在人肝细胞内Ca2+浓度调控方面及其对人肝细胞分泌功能的影响奠定了良好的实验基础.
目的: 構建人STIM1基因真覈錶達載體, 併觀察其在人肝細胞株(HL-7702)中的錶達.方法: 提取HL-7702細胞總RNA, RT-PCR擴增,經純化迴收後將片段剋隆至pGM-T載體, 酶切瓊脂糖凝膠電泳分析鑒定併測序, 最後用重組質粒轉染HL-7702細胞, 通過PCR-電泳和Western blot法檢測STIM1基因的錶達.結果: PCR擴增的片段長度為342 bp, 測序結果以及重組質粒pGM-T-STIM1的酶切瓊脂糖凝膠電泳鑒定結果均證明STIM1基因成功剋隆到真覈錶達載體中. PCR-電泳和Westernb l o t實驗結果分彆顯示轉染重組質粒後的HL-7702細胞在基因與蛋白水平錶達STIM1均有所增彊.結論: 成功構建瞭人STIM1基因的真覈錶達載體pGM-T-STIM1, 併在人肝細胞株HL-7702中穩定錶達, 為研究STIM1蛋白在人肝細胞內Ca2+濃度調控方麵及其對人肝細胞分泌功能的影響奠定瞭良好的實驗基礎.
목적: 구건인STIM1기인진핵표체재체, 병관찰기재인간세포주(HL-7702)중적표체.방법: 제취HL-7702세포총RNA, RT-PCR확증,경순화회수후장편단극륭지pGM-T재체, 매절경지당응효전영분석감정병측서, 최후용중조질립전염HL-7702세포, 통과PCR-전영화Western blot법검측STIM1기인적표체.결과: PCR확증적편단장도위342 bp, 측서결과이급중조질립pGM-T-STIM1적매절경지당응효전영감정결과균증명STIM1기인성공극륭도진핵표체재체중. PCR-전영화Westernb l o t실험결과분별현시전염중조질립후적HL-7702세포재기인여단백수평표체STIM1균유소증강.결론: 성공구건료인STIM1기인적진핵표체재체pGM-T-STIM1, 병재인간세포주HL-7702중은정표체, 위연구STIM1단백재인간세포내Ca2+농도조공방면급기대인간세포분비공능적영향전정료량호적실험기출.
