农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2010年
4期
807-814
,共8页
戴艺民%周以飞%陈建秋%林江波%张剑亮%林龙云%潘大仁
戴藝民%週以飛%陳建鞦%林江波%張劍亮%林龍雲%潘大仁
대예민%주이비%진건추%림강파%장검량%림룡운%반대인
睾丸酮丛毛单胞菌%3α-羟基类固醇脱氢酶/碳酰基还原酶(3α-HSD/CR)%activator%工程菌%稳定性
睪汍酮叢毛單胞菌%3α-羥基類固醇脫氫酶/碳酰基還原酶(3α-HSD/CR)%activator%工程菌%穩定性
고환동총모단포균%3α-간기류고순탈경매/탄선기환원매(3α-HSD/CR)%activator%공정균%은정성
本研究根据同源重组原理,利用电穿孔法将重组质粒pKtac1-actl和pKtac1-act2分别转化睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonas testosteroni),经PCR和Southern blot筛选获得2株睾丸酮丛毛单胞菌基因工程菌.对这两株基因工程菌的关键酶3α-羟基类固醇脱氢酶/碳酰基还原酶(3α-hydroxysteroid dehydrogenase/carbonyl reductase,3α-HSD/CR)表达情况和细菌稳定性的分析结果表明:两株基因工程菌在没有诱导剂诱导的情况下,其3α-HSD/CR的表达量比原始菌提高了近20倍.添加抗生素进行培养,两株工程菌的activator和3α-HSD/CR表达均较稳定;而在不添加抗生素的培养基上培养时,两株工程菌的activator和3α-HSD/CR的表达变化较大,蛋白总体表达水平比添加抗生素时低.研究结果可以初步推断,3α-HSD/CR的表达受activator基因的表达调控.
本研究根據同源重組原理,利用電穿孔法將重組質粒pKtac1-actl和pKtac1-act2分彆轉化睪汍酮叢毛單胞菌(Comamonas testosteroni),經PCR和Southern blot篩選穫得2株睪汍酮叢毛單胞菌基因工程菌.對這兩株基因工程菌的關鍵酶3α-羥基類固醇脫氫酶/碳酰基還原酶(3α-hydroxysteroid dehydrogenase/carbonyl reductase,3α-HSD/CR)錶達情況和細菌穩定性的分析結果錶明:兩株基因工程菌在沒有誘導劑誘導的情況下,其3α-HSD/CR的錶達量比原始菌提高瞭近20倍.添加抗生素進行培養,兩株工程菌的activator和3α-HSD/CR錶達均較穩定;而在不添加抗生素的培養基上培養時,兩株工程菌的activator和3α-HSD/CR的錶達變化較大,蛋白總體錶達水平比添加抗生素時低.研究結果可以初步推斷,3α-HSD/CR的錶達受activator基因的錶達調控.
본연구근거동원중조원리,이용전천공법장중조질립pKtac1-actl화pKtac1-act2분별전화고환동총모단포균(Comamonas testosteroni),경PCR화Southern blot사선획득2주고환동총모단포균기인공정균.대저량주기인공정균적관건매3α-간기류고순탈경매/탄선기환원매(3α-hydroxysteroid dehydrogenase/carbonyl reductase,3α-HSD/CR)표체정황화세균은정성적분석결과표명:량주기인공정균재몰유유도제유도적정황하,기3α-HSD/CR적표체량비원시균제고료근20배.첨가항생소진행배양,량주공정균적activator화3α-HSD/CR표체균교은정;이재불첨가항생소적배양기상배양시,량주공정균적activator화3α-HSD/CR적표체변화교대,단백총체표체수평비첨가항생소시저.연구결과가이초보추단,3α-HSD/CR적표체수activator기인적표체조공.
