中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2012年
8期
624-628
,共5页
乳酸菌%诱导表达载体%Nisin
乳痠菌%誘導錶達載體%Nisin
유산균%유도표체재체%Nisin
为构建乳酸菌Nisin诱导表达载体,实现外源目的基因在乳酸菌中的可控表达,本研究以产Nisin 乳酸乳球菌染色体DNA为模板,采用PCR技术扩增双组份调控元件nisRK基因和诱导型启动子nisA基因,并克隆至乳酸菌-大肠杆菌穿梭质粒pW425et中,以nisA基因替换原组成型启动子P32,构建乳酸菌Nisin诱导表达载体pW425N.为检测载体的诱导表达功能,以gfp基因作为报告基因,构建重组表达载体pW425N-gfp,以分离自仔猪肠道内嗜酸乳杆菌为受体菌,电转化法制备重组乳酸菌pW425N-gfp/L.acidophilus.结果表明,重组载体能够在Nisin诱导下表达目的荧光蛋白,并且最佳Nisin有效浓度为30ng/mL,最佳诱导时间为3h.该表达载体的构建为外源功能性蛋白在乳酸菌中的诱导表达奠定基础.
為構建乳痠菌Nisin誘導錶達載體,實現外源目的基因在乳痠菌中的可控錶達,本研究以產Nisin 乳痠乳毬菌染色體DNA為模闆,採用PCR技術擴增雙組份調控元件nisRK基因和誘導型啟動子nisA基因,併剋隆至乳痠菌-大腸桿菌穿梭質粒pW425et中,以nisA基因替換原組成型啟動子P32,構建乳痠菌Nisin誘導錶達載體pW425N.為檢測載體的誘導錶達功能,以gfp基因作為報告基因,構建重組錶達載體pW425N-gfp,以分離自仔豬腸道內嗜痠乳桿菌為受體菌,電轉化法製備重組乳痠菌pW425N-gfp/L.acidophilus.結果錶明,重組載體能夠在Nisin誘導下錶達目的熒光蛋白,併且最佳Nisin有效濃度為30ng/mL,最佳誘導時間為3h.該錶達載體的構建為外源功能性蛋白在乳痠菌中的誘導錶達奠定基礎.
위구건유산균Nisin유도표체재체,실현외원목적기인재유산균중적가공표체,본연구이산Nisin 유산유구균염색체DNA위모판,채용PCR기술확증쌍조빈조공원건nisRK기인화유도형계동자nisA기인,병극륭지유산균-대장간균천사질립pW425et중,이nisA기인체환원조성형계동자P32,구건유산균Nisin유도표체재체pW425N.위검측재체적유도표체공능,이gfp기인작위보고기인,구건중조표체재체pW425N-gfp,이분리자자저장도내기산유간균위수체균,전전화법제비중조유산균pW425N-gfp/L.acidophilus.결과표명,중조재체능구재Nisin유도하표체목적형광단백,병차최가Nisin유효농도위30ng/mL,최가유도시간위3h.해표체재체적구건위외원공능성단백재유산균중적유도표체전정기출.
