中国艾滋病性病
中國艾滋病性病
중국애자병성병
CHINESE JOURNAL OF AIDS & STD
2006年
4期
300-303,310
,共5页
刘强%杨贵波%褚亚芬%段丹丽%彭虹%邢辉%邵一鸣
劉彊%楊貴波%褚亞芬%段丹麗%彭虹%邢輝%邵一鳴
류강%양귀파%저아분%단단려%팽홍%형휘%소일명
人/猴免疫缺陷病毒(SHIV)%实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)%酶联免疫吸附试验(ELISA)%体外复制%病毒定量
人/猴免疫缺陷病毒(SHIV)%實時熒光定量逆轉錄聚閤酶鏈反應(RT-PCR)%酶聯免疫吸附試驗(ELISA)%體外複製%病毒定量
인/후면역결함병독(SHIV)%실시형광정량역전록취합매련반응(RT-PCR)%매련면역흡부시험(ELISA)%체외복제%병독정량
目的 建立一种实时、灵敏、特异的针对人/猴免疫缺陷病毒(SHIV)的RNA载量检测方法,通过与酶联免疫吸附试验(ELISA)进行比较,成为监测SHIV病毒体外复制过程的常用方法.方法 体外转录制备RNA标准品,利用TaqMan EZ逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)试剂盒的反应体系和针对SHIV gag保守区91个碱基的TaqMan探针与引物,建立一步法实时荧光定量RT-PCR.三种SHIV感染性分子克隆体外转染293T细胞,在不同的时间点采样,通过实时荧光定量RT-PCR和ELISA两种方法监测SHIV病毒复制过程.结果 两种方法监测的病毒复制过程基本一致,转染后2～48小时病毒复制出现明显的对数生长期,之后进入平台期,p24浓度大约103pg/ml,而RNA载量大约在108拷贝/ml.两者具有很好的相关性(r2＝0.834;P0.001).实时荧光定量RT-PCR灵敏度更高,检测范围更广,费用更低.结论 所建立的一步法检测SHIV病毒载量的实时荧光定量RT-PCR方法,可以作为监测SHIV体外扩增的常用方法.
目的 建立一種實時、靈敏、特異的針對人/猴免疫缺陷病毒(SHIV)的RNA載量檢測方法,通過與酶聯免疫吸附試驗(ELISA)進行比較,成為鑑測SHIV病毒體外複製過程的常用方法.方法 體外轉錄製備RNA標準品,利用TaqMan EZ逆轉錄聚閤酶鏈反應(RT-PCR)試劑盒的反應體繫和針對SHIV gag保守區91箇堿基的TaqMan探針與引物,建立一步法實時熒光定量RT-PCR.三種SHIV感染性分子剋隆體外轉染293T細胞,在不同的時間點採樣,通過實時熒光定量RT-PCR和ELISA兩種方法鑑測SHIV病毒複製過程.結果 兩種方法鑑測的病毒複製過程基本一緻,轉染後2～48小時病毒複製齣現明顯的對數生長期,之後進入平檯期,p24濃度大約103pg/ml,而RNA載量大約在108拷貝/ml.兩者具有很好的相關性(r2＝0.834;P0.001).實時熒光定量RT-PCR靈敏度更高,檢測範圍更廣,費用更低.結論 所建立的一步法檢測SHIV病毒載量的實時熒光定量RT-PCR方法,可以作為鑑測SHIV體外擴增的常用方法.
목적 건립일충실시、령민、특이적침대인/후면역결함병독(SHIV)적RNA재량검측방법,통과여매련면역흡부시험(ELISA)진행비교,성위감측SHIV병독체외복제과정적상용방법.방법 체외전록제비RNA표준품,이용TaqMan EZ역전록취합매련반응(RT-PCR)시제합적반응체계화침대SHIV gag보수구91개감기적TaqMan탐침여인물,건립일보법실시형광정량RT-PCR.삼충SHIV감염성분자극륭체외전염293T세포,재불동적시간점채양,통과실시형광정량RT-PCR화ELISA량충방법감측SHIV병독복제과정.결과 량충방법감측적병독복제과정기본일치,전염후2～48소시병독복제출현명현적대수생장기,지후진입평태기,p24농도대약103pg/ml,이RNA재량대약재108고패/ml.량자구유흔호적상관성(r2＝0.834;P0.001).실시형광정량RT-PCR령민도경고,검측범위경엄,비용경저.결론 소건립적일보법검측SHIV병독재량적실시형광정량RT-PCR방법,가이작위감측SHIV체외확증적상용방법.
