中国兽医学报
中國獸醫學報
중국수의학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE
2008年
6期
657-662
,共6页
杨银凤%郝永峰%赵艳芳%余兴帮%都格尔斯仁
楊銀鳳%郝永峰%趙豔芳%餘興幫%都格爾斯仁
양은봉%학영봉%조염방%여흥방%도격이사인
反向嵌套 PCR%5'RACE%3'RACE%β-防御素%驯鹿
反嚮嵌套 PCR%5'RACE%3'RACE%β-防禦素%馴鹿
반향감투 PCR%5'RACE%3'RACE%β-방어소%순록
为了获得驯鹿β-防御素reBD-1全长cDNA序列,根据已获得的reBD-1 cDNA的已知序列设计1条序列特异性引物作为上游引物,反转录引物中的部分序列即3′接舍器引物作为下游引物,克隆reBD-1 cDNA的3′末端序列.另外,采用反向嵌套PCR RACE法,根据reBD-1 cDNA的已知序列,设计1条5′末端磷酸化的特异性反转录引物和2对特异性反向嵌套PCR引物,首先进行反转录(RT),然后将mRNA反转录成的cDNA进行环化,最后进行反向嵌套巢式PCR,克隆reBD-1 cDNA的5′末端序列.结果成功的克隆出了reBD-1 cDNA的3′和5′末端序列,从而得到372 bp的reBD-1 cDNA全序列,其中包含44 bp 5′非翻译区(UTR)、192 bp的开放读码框(ORF)、终止密码子TAA、118 bp的3′UTR和poly(A)15.reBD-1 cDNA全序列的获得为进一步研究其基因结构、基因表达和基因功能奠定了基础.
為瞭穫得馴鹿β-防禦素reBD-1全長cDNA序列,根據已穫得的reBD-1 cDNA的已知序列設計1條序列特異性引物作為上遊引物,反轉錄引物中的部分序列即3′接捨器引物作為下遊引物,剋隆reBD-1 cDNA的3′末耑序列.另外,採用反嚮嵌套PCR RACE法,根據reBD-1 cDNA的已知序列,設計1條5′末耑燐痠化的特異性反轉錄引物和2對特異性反嚮嵌套PCR引物,首先進行反轉錄(RT),然後將mRNA反轉錄成的cDNA進行環化,最後進行反嚮嵌套巢式PCR,剋隆reBD-1 cDNA的5′末耑序列.結果成功的剋隆齣瞭reBD-1 cDNA的3′和5′末耑序列,從而得到372 bp的reBD-1 cDNA全序列,其中包含44 bp 5′非翻譯區(UTR)、192 bp的開放讀碼框(ORF)、終止密碼子TAA、118 bp的3′UTR和poly(A)15.reBD-1 cDNA全序列的穫得為進一步研究其基因結構、基因錶達和基因功能奠定瞭基礎.
위료획득순록β-방어소reBD-1전장cDNA서렬,근거이획득적reBD-1 cDNA적이지서렬설계1조서렬특이성인물작위상유인물,반전록인물중적부분서렬즉3′접사기인물작위하유인물,극륭reBD-1 cDNA적3′말단서렬.령외,채용반향감투PCR RACE법,근거reBD-1 cDNA적이지서렬,설계1조5′말단린산화적특이성반전록인물화2대특이성반향감투PCR인물,수선진행반전록(RT),연후장mRNA반전록성적cDNA진행배화,최후진행반향감투소식PCR,극륭reBD-1 cDNA적5′말단서렬.결과성공적극륭출료reBD-1 cDNA적3′화5′말단서렬,종이득도372 bp적reBD-1 cDNA전서렬,기중포함44 bp 5′비번역구(UTR)、192 bp적개방독마광(ORF)、종지밀마자TAA、118 bp적3′UTR화poly(A)15.reBD-1 cDNA전서렬적획득위진일보연구기기인결구、기인표체화기인공능전정료기출.
