CAJ | 학술논문

为筛选能够有效抑制J亚型禽白血病病毒(ALV-J)复制的siRNA,本研究根据ALV的pol基因保守序列设计合成5对shRNA序列,并将其分别克隆至pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR载体中,构建siRNA表达重组质粒,分别为pcDNA-sh-po1711、pcDNA-sh-po1814、pcDNA-sh-po11016、pcDNA-sh-po11915和pcDNA-sh-po12516.将重组质粒分别转染DF-1细胞6 h后,以100TCID50的ALV-J感染细胞,并利用IFA、western blot和real-timePCR方法评价其对ALV-J复制的抑制效果.IFA和western blot检测结果表明:其中pcDNA-sh-po1711、pcDNA-sh-po1814和pcDNA-sh-po12516可以有效抑制病毒囊膜蛋白的表达.Real-time PCR结果显示:与阴性对照和空载体对照相比,这3种siRNA在mRNA水平对ALV-J的抑制率达29%～86%.本研究在细胞水平上筛选的siRNAs可作为候选siRNAs,为抗鸡ALV-J的研究奠定基础.
위사선능구유효억제J아형금백혈병병독(ALV-J)복제적siRNA,본연구근거ALV적pol기인보수서렬설계합성5대shRNA서렬,병장기분별극륭지pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR재체중,구건siRNA표체중조질립,분별위pcDNA-sh-po1711、pcDNA-sh-po1814、pcDNA-sh-po11016、pcDNA-sh-po11915화pcDNA-sh-po12516.장중조질립분별전염DF-1세포6 h후,이100TCID50적ALV-J감염세포,병이용IFA、western blot화real-timePCR방법평개기대ALV-J복제적억제효과.IFA화western blot검측결과표명:기중pcDNA-sh-po1711、pcDNA-sh-po1814화pcDNA-sh-po12516가이유효억제병독낭막단백적표체.Real-time PCR결과현시:여음성대조화공재체대조상비,저3충siRNA재mRNA수평대ALV-J적억제솔체29%～86%.본연구재세포수평상사선적siRNAs가작위후선siRNAs,위항계ALV-J적연구전정기출.