中国脑血管病杂志
中國腦血管病雜誌
중국뇌혈관병잡지
CHINESE JOURNAL OF CEREBROVASCULAR DISEASES
2011年
10期
535-538
,共4页
鹿文葆%秦伟伟%刘淑英%李宏伟%修瑞娟
鹿文葆%秦偉偉%劉淑英%李宏偉%脩瑞娟
록문보%진위위%류숙영%리굉위%수서연
内皮细胞%脑微血管%细胞,培养的%大鼠%体外研究
內皮細胞%腦微血管%細胞,培養的%大鼠%體外研究
내피세포%뇌미혈관%세포,배양적%대서%체외연구
目的 探讨获取纯度较高的原代大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)的分离和培养方法.方法 选取10只3周龄Wistar大鼠,取大脑,去除白质,剪碎成大约1 mm3大小,通过两次酶消化、20% BSA离心和33%连续密度Percoll梯度离心,获得纯度较高的大脑微血管片段,接种于涂布明胶的35 mm dish培养皿中,加入含4 μg/ml嘌呤霉素的内皮细胞培养基,2d后更换新鲜培养基;采用倒置显微镜观察内皮细胞生长状况及其形态;免疫组化法检测BMECs标志物Ⅷ因子相关抗原(vWF)的表达,以及神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况.结果 培养24 h后可见内皮细胞从贴壁的脑微血管片段周围长出,细胞呈梭形;5-6d可形成融合;融合后的BMECs呈典型的"鹅卵石"样外观;免疫组化法检测显示BMECs的vWF表达阳性,GFAP表达阴性,内皮细胞纯度(vWF阳性细胞表达率)达96%以上.结论 该方法能够成功获得纯度较高的原代大鼠BMECs.
目的 探討穫取純度較高的原代大鼠腦微血管內皮細胞(BMECs)的分離和培養方法.方法 選取10隻3週齡Wistar大鼠,取大腦,去除白質,剪碎成大約1 mm3大小,通過兩次酶消化、20% BSA離心和33%連續密度Percoll梯度離心,穫得純度較高的大腦微血管片段,接種于塗佈明膠的35 mm dish培養皿中,加入含4 μg/ml嘌呤黴素的內皮細胞培養基,2d後更換新鮮培養基;採用倒置顯微鏡觀察內皮細胞生長狀況及其形態;免疫組化法檢測BMECs標誌物Ⅷ因子相關抗原(vWF)的錶達,以及神經膠質原纖維痠性蛋白(GFAP)的錶達情況.結果 培養24 h後可見內皮細胞從貼壁的腦微血管片段週圍長齣,細胞呈梭形;5-6d可形成融閤;融閤後的BMECs呈典型的"鵝卵石"樣外觀;免疫組化法檢測顯示BMECs的vWF錶達暘性,GFAP錶達陰性,內皮細胞純度(vWF暘性細胞錶達率)達96%以上.結論 該方法能夠成功穫得純度較高的原代大鼠BMECs.
목적 탐토획취순도교고적원대대서뇌미혈관내피세포(BMECs)적분리화배양방법.방법 선취10지3주령Wistar대서,취대뇌,거제백질,전쇄성대약1 mm3대소,통과량차매소화、20% BSA리심화33%련속밀도Percoll제도리심,획득순도교고적대뇌미혈관편단,접충우도포명효적35 mm dish배양명중,가입함4 μg/ml표령매소적내피세포배양기,2d후경환신선배양기;채용도치현미경관찰내피세포생장상황급기형태;면역조화법검측BMECs표지물Ⅷ인자상관항원(vWF)적표체,이급신경효질원섬유산성단백(GFAP)적표체정황.결과 배양24 h후가견내피세포종첩벽적뇌미혈관편단주위장출,세포정사형;5-6d가형성융합;융합후적BMECs정전형적"아란석"양외관;면역조화법검측현시BMECs적vWF표체양성,GFAP표체음성,내피세포순도(vWF양성세포표체솔)체96%이상.결론 해방법능구성공획득순도교고적원대대서BMECs.
