中华检验医学杂志
中華檢驗醫學雜誌
중화검험의학잡지
CHINESE JOURNAL OF LABORATORY MEDICINE
2004年
1期
17-19
,共3页
林裕龙%彭永正%冯桂湘%侯金林
林裕龍%彭永正%馮桂湘%侯金林
림유룡%팽영정%풍계상%후금림
肝炎E抗原,乙型%聚合酶链反应%多态性,限制性片段长度
肝炎E抗原,乙型%聚閤酶鏈反應%多態性,限製性片段長度
간염E항원,을형%취합매련반응%다태성,한제성편단장도
目的探讨乙型肝炎病毒前C信号肽酶裂解位点变异后乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)表达的改变.方法以聚合酶链反应结合限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法筛检前C信号肽酶裂解位点变异的病例,经PCR扩增出编码HBeAg的前C/C区基因并克隆于EB病毒真核表达载体(EBO),以脂质体介导方法将变异株与野株分别转染HepG2细胞,利用SEAP报告系统监测转染效率,用酶联免疫吸附方法(ELISA)和免疫印迹(Western blot)方法检测转染不同病毒株的细胞外和细胞内HBeAg的量.结果转染野株的细胞培养上清经ELISA方法可检测到HBeAg阳性;而转染变异株的细胞培养上清中HBeAg为阴性.培养细胞内部以Western blot方法检测发现野株可表达三种蛋白,即HBeAg(分子量17 000)和两种HBeAg前体(22 000和25 000),而变异株只能检测到两种HBeAg前体,且变异株的HBeAg前体密度带明显比野株强.结论乙型肝炎病毒前C信号肽酶裂解位点变异后可能影响HBeAg的翻译后加工,导致大量的HBeAg前体在细胞中蓄积,这可能导致HBV感染者血清HBeAg阴性.
目的探討乙型肝炎病毒前C信號肽酶裂解位點變異後乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)錶達的改變.方法以聚閤酶鏈反應結閤限製性片段長度多態性(PCR-RFLP)方法篩檢前C信號肽酶裂解位點變異的病例,經PCR擴增齣編碼HBeAg的前C/C區基因併剋隆于EB病毒真覈錶達載體(EBO),以脂質體介導方法將變異株與野株分彆轉染HepG2細胞,利用SEAP報告繫統鑑測轉染效率,用酶聯免疫吸附方法(ELISA)和免疫印跡(Western blot)方法檢測轉染不同病毒株的細胞外和細胞內HBeAg的量.結果轉染野株的細胞培養上清經ELISA方法可檢測到HBeAg暘性;而轉染變異株的細胞培養上清中HBeAg為陰性.培養細胞內部以Western blot方法檢測髮現野株可錶達三種蛋白,即HBeAg(分子量17 000)和兩種HBeAg前體(22 000和25 000),而變異株隻能檢測到兩種HBeAg前體,且變異株的HBeAg前體密度帶明顯比野株彊.結論乙型肝炎病毒前C信號肽酶裂解位點變異後可能影響HBeAg的翻譯後加工,導緻大量的HBeAg前體在細胞中蓄積,這可能導緻HBV感染者血清HBeAg陰性.
목적탐토을형간염병독전C신호태매렬해위점변이후을형간염병독e항원(HBeAg)표체적개변.방법이취합매련반응결합한제성편단장도다태성(PCR-RFLP)방법사검전C신호태매렬해위점변이적병례,경PCR확증출편마HBeAg적전C/C구기인병극륭우EB병독진핵표체재체(EBO),이지질체개도방법장변이주여야주분별전염HepG2세포,이용SEAP보고계통감측전염효솔,용매련면역흡부방법(ELISA)화면역인적(Western blot)방법검측전염불동병독주적세포외화세포내HBeAg적량.결과전염야주적세포배양상청경ELISA방법가검측도HBeAg양성;이전염변이주적세포배양상청중HBeAg위음성.배양세포내부이Western blot방법검측발현야주가표체삼충단백,즉HBeAg(분자량17 000)화량충HBeAg전체(22 000화25 000),이변이주지능검측도량충HBeAg전체,차변이주적HBeAg전체밀도대명현비야주강.결론을형간염병독전C신호태매렬해위점변이후가능영향HBeAg적번역후가공,도치대량적HBeAg전체재세포중축적,저가능도치HBV감염자혈청HBeAg음성.
