诊断学理论与实践
診斷學理論與實踐
진단학이론여실천
JOURNAL OF DIAGNOSTICS CONCEPTS & PRACTICE
2012年
3期
295-298
,共4页
腺病毒载体%Net基因%克隆%293细胞
腺病毒載體%Net基因%剋隆%293細胞
선병독재체%Net기인%극륭%293세포
目的:克隆人三元复合因子Net全长基因,构建其重组腺病毒载体.方法:抽提正常人胰腺组织中总RNA,经RT-PCR扩增出全长Net基因,利用同源重组的方法将腺病毒骨架质粒pBHG35和穿梭质粒pDC316- Net共转染293细胞,获得腺病毒重组质粒Ad5/F35-Net,在293细胞中包装和扩增后,获得高滴度的腺病毒重组质粒Ad5/F35-Net.采用PCR和蛋白印迹法检测Net基因的表达.结果:用RT-PCR方法,从人胰腺癌组织中扩增出1224bp的cDNA片段,经测序证实为人Net基因.最终构建及包装出高滴度的重组腺病毒载体Ad5/F35-Net.结论:成功克隆了人Net全长基因,并构建其重组腺病毒表达载体,为进一步研究人Net基因在相关肿瘤疾病中的生物学作用奠定了基础.
目的:剋隆人三元複閤因子Net全長基因,構建其重組腺病毒載體.方法:抽提正常人胰腺組織中總RNA,經RT-PCR擴增齣全長Net基因,利用同源重組的方法將腺病毒骨架質粒pBHG35和穿梭質粒pDC316- Net共轉染293細胞,穫得腺病毒重組質粒Ad5/F35-Net,在293細胞中包裝和擴增後,穫得高滴度的腺病毒重組質粒Ad5/F35-Net.採用PCR和蛋白印跡法檢測Net基因的錶達.結果:用RT-PCR方法,從人胰腺癌組織中擴增齣1224bp的cDNA片段,經測序證實為人Net基因.最終構建及包裝齣高滴度的重組腺病毒載體Ad5/F35-Net.結論:成功剋隆瞭人Net全長基因,併構建其重組腺病毒錶達載體,為進一步研究人Net基因在相關腫瘤疾病中的生物學作用奠定瞭基礎.
목적:극륭인삼원복합인자Net전장기인,구건기중조선병독재체.방법:추제정상인이선조직중총RNA,경RT-PCR확증출전장Net기인,이용동원중조적방법장선병독골가질립pBHG35화천사질립pDC316- Net공전염293세포,획득선병독중조질립Ad5/F35-Net,재293세포중포장화확증후,획득고적도적선병독중조질립Ad5/F35-Net.채용PCR화단백인적법검측Net기인적표체.결과:용RT-PCR방법,종인이선암조직중확증출1224bp적cDNA편단,경측서증실위인Net기인.최종구건급포장출고적도적중조선병독재체Ad5/F35-Net.결론:성공극륭료인Net전장기인,병구건기중조선병독표체재체,위진일보연구인Net기인재상관종류질병중적생물학작용전정료기출.
