CAJ | 학술논문

为观察咖啡因间歇刺激是否减轻环孢素A所致的细胞毒性及对骨骼肌细胞的泛素-蛋白酶体途径和钙蛋白酶活性的影响,将分化的L6肌管细胞分为4组,即对照组、咖啡因组、环孢素A组和咖啡因十环孢素A组.咖啡因(5 mmol/L)和环孢素A(10μmol/L)每天刺激5h,连续刺激5d,然后收集细胞.荧光实时定量PCR检测FoxO1、MAFbx、MuRF1基因表达；Western blot法检测FoxO1、MAFbx、MuRFI和20S蛋白含量；荧光定量法检测20 S蛋白酶和钙蛋白醇的体外活性.结果表明,加环孢素A的两组细胞大小明显小于另外两组,且咖啡因间歇刺激可以减轻环孢素A诱导的肌管细胞萎缩；间歇刺激下,加咖啡因的两组FoxO1mRNA表达下调；MuRF1和MAFbx两个基因的表达在各组之间无差异,且咖啡因和环孢素A对FoxO1/MuRF1/MAFbx和20 S蛋白酶体蛋白含量皆无主效应.荧光定量检测蛋白酶活性结果显示,咖啡因和环孢素A不影响20 S蛋白酶体的活性,但对钙蛋白酶体外活性有交互影响.环孢素组钙蛋白酶体外活性低于正常组；环孢素A+咖啡因组低于咖啡因组,但高于环孢素组.说明咖啡因间歇刺激可减轻环孢素A所致的肌管萎缩,且咖啡因间歇刺激改可善环孢素A抑制的钙蛋白酶体外活性.
위관찰가배인간헐자격시부감경배포소A소치적세포독성급대골격기세포적범소-단백매체도경화개단백매활성적영향,장분화적L6기관세포분위4조,즉대조조、가배인조、배포소A조화가배인십배포소A조.가배인(5 mmol/L)화배포소A(10μmol/L)매천자격5h,련속자격5d,연후수집세포.형광실시정량PCR검측FoxO1、MAFbx、MuRF1기인표체；Western blot법검측FoxO1、MAFbx、MuRFI화20S단백함량；형광정량법검측20 S단백매화개단백순적체외활성.결과표명,가배포소A적량조세포대소명현소우령외량조,차가배인간헐자격가이감경배포소A유도적기관세포위축；간헐자격하,가가배인적량조FoxO1mRNA표체하조；MuRF1화MAFbx량개기인적표체재각조지간무차이,차가배인화배포소A대FoxO1/MuRF1/MAFbx화20 S단백매체단백함량개무주효응.형광정량검측단백매활성결과현시,가배인화배포소A불영향20 S단백매체적활성,단대개단백매체외활성유교호영향.배포소조개단백매체외활성저우정상조；배포소A+가배인조저우가배인조,단고우배포소조.설명가배인간헐자격가감경배포소A소치적기관위축,차가배인간헐자격개가선배포소A억제적개단백매체외활성.