CAJ | 학술논문

目的优化制备蛋白质微阵列的几个关键因素,初步建立自身免疫性疾病抗体检测微阵列,以期用于自身免疫性疾病的诊断.方法选择与制备蛋白质微阵列有关的4个因素,即温育时间、封闭剂、封闭时间和与二抗结合时间,进行正交优化,得出制备蛋白质微阵列的最优化条件,并根据该条件,进一步确定6种自身抗原适合的点样浓度及血清的最佳稀释度.根据优化条件,制备出同时检测6种自身抗体的微阵列,并初步应用,与间接免疫荧光(ⅡF)法和酶联免疫吸附试验(ELISA)法加以比较,对结果进行评价.结果制备蛋白质微阵列的最佳优化条件是温育2 h,封闭剂采用含有1%小牛血清白蛋白和2.5%蔗糖的PBST,封闭时间为30 min,与二抗反应30 min,6种自身抗原适合点样浓度从100 μg/ml到300μg/ml不等,最佳血清稀释浓度是1:2.微阵列法对抗核抗体(ANA)的检测与ⅡF法相比,灵敏度是88.6%,特异度是83.3%,微阵列法对其他5种自身抗体的检测与ELISA法相比,灵敏度在80.0%～88.2%之间,特异度在90.2%～98.6%之间.结论上述优化条件适合于制备自身免疫性疾病抗体检测微阵列,微阵列检测结果与现有常规方法检测结果比较一致,值得推广应用.
목적우화제비단백질미진렬적궤개관건인소,초보건립자신면역성질병항체검측미진렬,이기용우자신면역성질병적진단.방법선택여제비단백질미진렬유관적4개인소,즉온육시간、봉폐제、봉폐시간화여이항결합시간,진행정교우화,득출제비단백질미진렬적최우화조건,병근거해조건,진일보학정6충자신항원괄합적점양농도급혈청적최가희석도.근거우화조건,제비출동시검측6충자신항체적미진렬,병초보응용,여간접면역형광(ⅡF)법화매련면역흡부시험(ELISA)법가이비교,대결과진행평개.결과제비단백질미진렬적최가우화조건시온육2 h,봉폐제채용함유1%소우혈청백단백화2.5%자당적PBST,봉폐시간위30 min,여이항반응30 min,6충자신항원괄합점양농도종100 μg/ml도300μg/ml불등,최가혈청희석농도시1:2.미진렬법대항핵항체(ANA)적검측여ⅡF법상비,령민도시88.6%,특이도시83.3%,미진렬법대기타5충자신항체적검측여ELISA법상비,령민도재80.0%～88.2%지간,특이도재90.2%～98.6%지간.결론상술우화조건괄합우제비자신면역성질병항체검측미진렬,미진렬검측결과여현유상규방법검측결과비교일치,치득추엄응용.