中华流行病学杂志
中華流行病學雜誌
중화류행병학잡지
CHINESE JOURNAL OF EPIDEMIOLOGY
2006年
12期
1073-1077
,共5页
孙百莉%罗冬娇%孙军德%严杰
孫百莉%囉鼕嬌%孫軍德%嚴傑
손백리%라동교%손군덕%엄걸
问号钩端螺旋体%外膜蛋白%属特异性抗原%交叉凝集%免疫性鉴定
問號鉤耑螺鏇體%外膜蛋白%屬特異性抗原%交扠凝集%免疫性鑒定
문호구단라선체%외막단백%속특이성항원%교차응집%면역성감정
目的 确定致病性问号钩端螺旋体(钩体)属特异性外膜蛋白的抗原性和交叉免疫反应性,为研制通用性钩体基因工程疫苗及检测试剂盒提供依据.方法 采用Ni-NTA亲和层析法,提取了4种钩体外膜蛋白主要基因型重组表达产物rLipL21、rLipL32/1和rLipL32/2、rLipL41/1和rLipL41/2、rOmpL1/1和rOmpL1/2,并用SDS-PAGE检测表达及提纯效果.上述重组蛋白常规皮下免疫家兔获得抗血清,显微镜凝集试验(MAT)检测各抗血清交叉凝集效价.采用盐变法提取了我国15群问号钩体参考标准株及非致病的双曲钩体Patoc Ⅰ株的外膜蛋白.以兔抗血清为一抗,采用Western blot检测上述4种外膜蛋白自然表达情况及其免疫反应性.结果 rLipL21、rLipL32/1和rLipL32/2、rLipL41/1和rLipL41/2、rOmpL1/1和rOmpL1/2表达量分别约占细菌总蛋白的10%、40%和35%、15%和10%、30%和15%,各重组蛋白SDS-PAGE提纯后均仅见单一的蛋白条带.重组蛋白兔抗血清在同一基因不同基因型表达产物之间有广泛的交叉免疫反应性,与不同钩体血清群的MAT效价为1:2～1:128.各血清群钩体外膜中均可检出上述4种外膜蛋白,但LipL21仅存在于问号钩体中.结论 LipL21、LipL32、LipL41、OmpL1均为钩体属特异性表面抗原,可作为通用性钩体疫苗及检测试剂盒的候选抗原.
目的 確定緻病性問號鉤耑螺鏇體(鉤體)屬特異性外膜蛋白的抗原性和交扠免疫反應性,為研製通用性鉤體基因工程疫苗及檢測試劑盒提供依據.方法 採用Ni-NTA親和層析法,提取瞭4種鉤體外膜蛋白主要基因型重組錶達產物rLipL21、rLipL32/1和rLipL32/2、rLipL41/1和rLipL41/2、rOmpL1/1和rOmpL1/2,併用SDS-PAGE檢測錶達及提純效果.上述重組蛋白常規皮下免疫傢兔穫得抗血清,顯微鏡凝集試驗(MAT)檢測各抗血清交扠凝集效價.採用鹽變法提取瞭我國15群問號鉤體參攷標準株及非緻病的雙麯鉤體Patoc Ⅰ株的外膜蛋白.以兔抗血清為一抗,採用Western blot檢測上述4種外膜蛋白自然錶達情況及其免疫反應性.結果 rLipL21、rLipL32/1和rLipL32/2、rLipL41/1和rLipL41/2、rOmpL1/1和rOmpL1/2錶達量分彆約佔細菌總蛋白的10%、40%和35%、15%和10%、30%和15%,各重組蛋白SDS-PAGE提純後均僅見單一的蛋白條帶.重組蛋白兔抗血清在同一基因不同基因型錶達產物之間有廣汎的交扠免疫反應性,與不同鉤體血清群的MAT效價為1:2～1:128.各血清群鉤體外膜中均可檢齣上述4種外膜蛋白,但LipL21僅存在于問號鉤體中.結論 LipL21、LipL32、LipL41、OmpL1均為鉤體屬特異性錶麵抗原,可作為通用性鉤體疫苗及檢測試劑盒的候選抗原.
목적 학정치병성문호구단라선체(구체)속특이성외막단백적항원성화교차면역반응성,위연제통용성구체기인공정역묘급검측시제합제공의거.방법 채용Ni-NTA친화층석법,제취료4충구체외막단백주요기인형중조표체산물rLipL21、rLipL32/1화rLipL32/2、rLipL41/1화rLipL41/2、rOmpL1/1화rOmpL1/2,병용SDS-PAGE검측표체급제순효과.상술중조단백상규피하면역가토획득항혈청,현미경응집시험(MAT)검측각항혈청교차응집효개.채용염변법제취료아국15군문호구체삼고표준주급비치병적쌍곡구체Patoc Ⅰ주적외막단백.이토항혈청위일항,채용Western blot검측상술4충외막단백자연표체정황급기면역반응성.결과 rLipL21、rLipL32/1화rLipL32/2、rLipL41/1화rLipL41/2、rOmpL1/1화rOmpL1/2표체량분별약점세균총단백적10%、40%화35%、15%화10%、30%화15%,각중조단백SDS-PAGE제순후균부견단일적단백조대.중조단백토항혈청재동일기인불동기인형표체산물지간유엄범적교차면역반응성,여불동구체혈청군적MAT효개위1:2～1:128.각혈청군구체외막중균가검출상술4충외막단백,단LipL21부존재우문호구체중.결론 LipL21、LipL32、LipL41、OmpL1균위구체속특이성표면항원,가작위통용성구체역묘급검측시제합적후선항원.
