CAJ | 학술논문

目的建立一种准确、稳定的自然杀伤细胞(NK)活性检测方法.方法通过电穿孔法将含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的质粒转入K562细胞,经G418筛选后进行克隆,获得EGFP阳性表达细胞株;采用流式细胞仪和乳酸脱氢酶法检测10名健康人外周血NK细胞活性.结果通过基因转染的方法得到1株稳定表达EGFP的K562细胞,转染EGFP对细胞生长无影响,10名健康人外周血NK细胞对转染EGFP的细胞及未转染细胞的杀伤活性无差异(P＞0.05);表达EGFP的K562细胞在效靶比为40:1时,用流式细胞仪检测培养2和4 h时的NK细胞杀伤率分别为(21.5±1.3)%和(23.7±1.5)%,二者无差异(P＞0.05);而用乳酸脱氢酶法测定培养4 h的NK细胞对K562和EGFP-K562的杀伤率[分别为(23.6±2.3)%和(23.7±2.3)%]均高于2 h的杀伤率[(18.0±1.1)%和(18.2±1.3)%,P＜0.05].结论成功建立了表达EGFP的K562细胞株,将该细胞株作为靶细胞用于流式细胞术检测NK细胞活性时,无需预先染色和标记靶细胞,且操作简便、省时、稳定、可靠.
목적건립일충준학、은정적자연살상세포(NK)활성검측방법.방법통과전천공법장함증강형록색형광단백(EGFP)적질립전입K562세포,경G418사선후진행극륭,획득EGFP양성표체세포주;채용류식세포의화유산탈경매법검측10명건강인외주혈NK세포활성.결과통과기인전염적방법득도1주은정표체EGFP적K562세포,전염EGFP대세포생장무영향,10명건강인외주혈NK세포대전염EGFP적세포급미전염세포적살상활성무차이(P＞0.05);표체EGFP적K562세포재효파비위40:1시,용류식세포의검측배양2화4 h시적NK세포살상솔분별위(21.5±1.3)%화(23.7±1.5)%,이자무차이(P＞0.05);이용유산탈경매법측정배양4 h적NK세포대K562화EGFP-K562적살상솔[분별위(23.6±2.3)%화(23.7±2.3)%]균고우2 h적살상솔[(18.0±1.1)%화(18.2±1.3)%,P＜0.05].결론성공건립료표체EGFP적K562세포주,장해세포주작위파세포용우류식세포술검측NK세포활성시,무수예선염색화표기파세포,차조작간편、성시、은정、가고.