中国农业科学
中國農業科學
중국농업과학
SCIENTIA AGRICULTURA SINICA
2004年
8期
1217-1221
,共5页
吴绍强%蒋金书%刘群%朱引洁
吳紹彊%蔣金書%劉群%硃引潔
오소강%장금서%류군%주인길
柔嫩艾美耳球虫%抗原%TA4%SDS-PAGE%Western blotting
柔嫩艾美耳毬蟲%抗原%TA4%SDS-PAGE%Western blotting
유눈애미이구충%항원%TA4%SDS-PAGE%Western blotting
球虫子孢子表面抗原TA4(25kD)是通过二硫键连接8和17 kD 2条多肽形成的,在孢子化后期合成.E.tenella BJ株的TA4基因同国外株的同源性为99%.本试验进行了TA4基因的原核融合表达,并对表达蛋白的SDS-PAGE电泳特性进行探究.试验发现,以pGEX-KG为载体,用IPTG可诱导TA4基因在E.coli BL21(DE3)中的表达.SDS-PAGE表明,融合蛋白大小约43 kD,而非推测的51kD,诱导6 h的蛋白表达量即可达到较高水平,表达量约为31%.采用抗GST抗体进行Western b1otting,成功检测到了特异性条带.说明SDS-PAGE前的样品煮沸处理可使连接TA42条多肽的二硫键断裂,只有17 kD的多肽可与26kD GST蛋白结合.样品采用反复冻融法处理,加入还原型谷胱苷肽后,采用GST凝胶回收柱Sepharose 4B纯化的融合蛋白主要为51 kD的单一条带,煮沸变性后电泳,则43kD带含量增加.说明纯化过程可影响GST-TA4融合蛋白的特性.
毬蟲子孢子錶麵抗原TA4(25kD)是通過二硫鍵連接8和17 kD 2條多肽形成的,在孢子化後期閤成.E.tenella BJ株的TA4基因同國外株的同源性為99%.本試驗進行瞭TA4基因的原覈融閤錶達,併對錶達蛋白的SDS-PAGE電泳特性進行探究.試驗髮現,以pGEX-KG為載體,用IPTG可誘導TA4基因在E.coli BL21(DE3)中的錶達.SDS-PAGE錶明,融閤蛋白大小約43 kD,而非推測的51kD,誘導6 h的蛋白錶達量即可達到較高水平,錶達量約為31%.採用抗GST抗體進行Western b1otting,成功檢測到瞭特異性條帶.說明SDS-PAGE前的樣品煮沸處理可使連接TA42條多肽的二硫鍵斷裂,隻有17 kD的多肽可與26kD GST蛋白結閤.樣品採用反複凍融法處理,加入還原型穀胱苷肽後,採用GST凝膠迴收柱Sepharose 4B純化的融閤蛋白主要為51 kD的單一條帶,煮沸變性後電泳,則43kD帶含量增加.說明純化過程可影響GST-TA4融閤蛋白的特性.
구충자포자표면항원TA4(25kD)시통과이류건련접8화17 kD 2조다태형성적,재포자화후기합성.E.tenella BJ주적TA4기인동국외주적동원성위99%.본시험진행료TA4기인적원핵융합표체,병대표체단백적SDS-PAGE전영특성진행탐구.시험발현,이pGEX-KG위재체,용IPTG가유도TA4기인재E.coli BL21(DE3)중적표체.SDS-PAGE표명,융합단백대소약43 kD,이비추측적51kD,유도6 h적단백표체량즉가체도교고수평,표체량약위31%.채용항GST항체진행Western b1otting,성공검측도료특이성조대.설명SDS-PAGE전적양품자비처리가사련접TA42조다태적이류건단렬,지유17 kD적다태가여26kD GST단백결합.양품채용반복동융법처리,가입환원형곡광감태후,채용GST응효회수주Sepharose 4B순화적융합단백주요위51 kD적단일조대,자비변성후전영,칙43kD대함량증가.설명순화과정가영향GST-TA4융합단백적특성.