细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2006年
4期
427-429,432
,共4页
周时勇%杨明峰%王雪峰%于葛华%成中芹%张学光
週時勇%楊明峰%王雪峰%于葛華%成中芹%張學光
주시용%양명봉%왕설봉%우갈화%성중근%장학광
CXCR4%逆转录病毒%稳定表达%迁移
CXCR4%逆轉錄病毒%穩定錶達%遷移
CXCR4%역전록병독%은정표체%천이
目的: 构建稳定表达人CXCR4基因的L929细胞株,分析CXCR4分子对转基因细胞迁移能力的影响.方法: TRIzol一步法抽提人外周血单个核细胞(PBMC)总RNA,RT-PCR扩增出CXCR4基因,双酶切装入逆转录病毒载体pEGZ-Term,与辅助病毒载体用脂质体法共转染包装细胞293T,用其培养上清感染L929细胞72 h后,经Zeocin筛选出稳定表达CXCR4分子的L929细胞株;利用微孔隔离小室检测转人CXCR4基因的L929细胞在SDF-1α作用下的迁移能力.结果: 构建含CXCR4基因的重组逆转录病毒载体,经转染包装细胞293T后,筛选获得能稳定高表达人CXCR4蛋白的L929转基因细胞,转入人CXCR4基因的L929细胞在SDF-1α作用下介导迁移.结论: 成功构建转染人CXCR4细胞株,为肿瘤迁移模型的研究和鼠抗人CXCR4 mAb的制备打下基础.
目的: 構建穩定錶達人CXCR4基因的L929細胞株,分析CXCR4分子對轉基因細胞遷移能力的影響.方法: TRIzol一步法抽提人外週血單箇覈細胞(PBMC)總RNA,RT-PCR擴增齣CXCR4基因,雙酶切裝入逆轉錄病毒載體pEGZ-Term,與輔助病毒載體用脂質體法共轉染包裝細胞293T,用其培養上清感染L929細胞72 h後,經Zeocin篩選齣穩定錶達CXCR4分子的L929細胞株;利用微孔隔離小室檢測轉人CXCR4基因的L929細胞在SDF-1α作用下的遷移能力.結果: 構建含CXCR4基因的重組逆轉錄病毒載體,經轉染包裝細胞293T後,篩選穫得能穩定高錶達人CXCR4蛋白的L929轉基因細胞,轉入人CXCR4基因的L929細胞在SDF-1α作用下介導遷移.結論: 成功構建轉染人CXCR4細胞株,為腫瘤遷移模型的研究和鼠抗人CXCR4 mAb的製備打下基礎.
목적: 구건은정표체인CXCR4기인적L929세포주,분석CXCR4분자대전기인세포천이능력적영향.방법: TRIzol일보법추제인외주혈단개핵세포(PBMC)총RNA,RT-PCR확증출CXCR4기인,쌍매절장입역전록병독재체pEGZ-Term,여보조병독재체용지질체법공전염포장세포293T,용기배양상청감염L929세포72 h후,경Zeocin사선출은정표체CXCR4분자적L929세포주;이용미공격리소실검측전인CXCR4기인적L929세포재SDF-1α작용하적천이능력.결과: 구건함CXCR4기인적중조역전록병독재체,경전염포장세포293T후,사선획득능은정고표체인CXCR4단백적L929전기인세포,전입인CXCR4기인적L929세포재SDF-1α작용하개도천이.결론: 성공구건전염인CXCR4세포주,위종류천이모형적연구화서항인CXCR4 mAb적제비타하기출.
