上海交通大学学报（医学版）
上海交通大學學報（醫學版）
상해교통대학학보（의학판）
JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE)
2006年
11期
1233-1238
,共6页
梅文瀚%吴兆平%徐荣婷%钱关祥%卢健
梅文瀚%吳兆平%徐榮婷%錢關祥%盧健
매문한%오조평%서영정%전관상%로건
基因治疗%EB病毒%复制子%附着体质粒载体%核基质结合区
基因治療%EB病毒%複製子%附著體質粒載體%覈基質結閤區
기인치료%EB병독%복제자%부착체질립재체%핵기질결합구
目的 建立一个非病毒介导外源基因高效转移和稳定表达体系.方法 采用EB病毒(EBV)来源的附着体质粒载体,并结合顺式作用元件IFN-MAR构建重组质粒pcDNA3-EGFP-EBVR和pcDNA3-EGFP-EBNA1-MAR.采用荧光显微镜观察并摄片,FACS及逆转录-聚合酶链反应检测EGFP表达阳性的COS-7细胞比例、荧光表达强度及EGFP基因的转录.通过Southern印迹和质粒还原实验分析质粒DNA在细胞中存在的形式.结果 本实验构建的重组质粒载体pcDNA3-EGFP-EBVR和pcDNA3-EGFP-EBNA1-MAR在转染进入COS-7细胞后以染色体外附着体的形式存在.由于EBVR的存在,可以在体外获得EGFP较长时间的稳定表达.IFN-MAR替代OriP后,仍可在体外获得EGFP的稳定表达.结论 MAR修饰的EBV附着体载体可以在体外获得外源基因高效稳定的表达.
目的 建立一箇非病毒介導外源基因高效轉移和穩定錶達體繫.方法 採用EB病毒(EBV)來源的附著體質粒載體,併結閤順式作用元件IFN-MAR構建重組質粒pcDNA3-EGFP-EBVR和pcDNA3-EGFP-EBNA1-MAR.採用熒光顯微鏡觀察併攝片,FACS及逆轉錄-聚閤酶鏈反應檢測EGFP錶達暘性的COS-7細胞比例、熒光錶達彊度及EGFP基因的轉錄.通過Southern印跡和質粒還原實驗分析質粒DNA在細胞中存在的形式.結果 本實驗構建的重組質粒載體pcDNA3-EGFP-EBVR和pcDNA3-EGFP-EBNA1-MAR在轉染進入COS-7細胞後以染色體外附著體的形式存在.由于EBVR的存在,可以在體外穫得EGFP較長時間的穩定錶達.IFN-MAR替代OriP後,仍可在體外穫得EGFP的穩定錶達.結論 MAR脩飾的EBV附著體載體可以在體外穫得外源基因高效穩定的錶達.
목적 건립일개비병독개도외원기인고효전이화은정표체체계.방법 채용EB병독(EBV)래원적부착체질립재체,병결합순식작용원건IFN-MAR구건중조질립pcDNA3-EGFP-EBVR화pcDNA3-EGFP-EBNA1-MAR.채용형광현미경관찰병섭편,FACS급역전록-취합매련반응검측EGFP표체양성적COS-7세포비례、형광표체강도급EGFP기인적전록.통과Southern인적화질립환원실험분석질립DNA재세포중존재적형식.결과 본실험구건적중조질립재체pcDNA3-EGFP-EBVR화pcDNA3-EGFP-EBNA1-MAR재전염진입COS-7세포후이염색체외부착체적형식존재.유우EBVR적존재,가이재체외획득EGFP교장시간적은정표체.IFN-MAR체대OriP후,잉가재체외획득EGFP적은정표체.결론 MAR수식적EBV부착체재체가이재체외획득외원기인고효은정적표체.
