生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2007年
2期
284-291
,共8页
贾仟涛%徐丽慧%李丰耀%查庆兵%何贤辉
賈仟濤%徐麗慧%李豐耀%查慶兵%何賢輝
가천도%서려혜%리봉요%사경병%하현휘
四聚体%HLA-A*2402%巨细胞病毒%密码子优化%原核表达%包涵体
四聚體%HLA-A*2402%巨細胞病毒%密碼子優化%原覈錶達%包涵體
사취체%HLA-A*2402%거세포병독%밀마자우화%원핵표체%포함체
HLA-A*2402是中国人群中最常见的等位基因之一,为研究该基因型人群的人巨细胞病毒(HCMV)特异性细胞毒T细胞(CTL)免疫应答,需要制备负载相应抗原肽的HLA-A*2402四聚体.以RT-PCR方法克隆HLA-A*2402重链基因的cDNA,并构建了羧基端融合生物素化酶BirA底物肽(BSP)的HLA-A*2402重链胞外域融合蛋白(HLA-A*2402-BSP)的表达载体,但该载体不能在大肠杆菌(E.coli)中有效表达HLA-A*2402-BSP融合蛋白;通过对氨基端(N端)区域编码区的密码子进行优化,构建了同义突变的HLA-A*2402-BSP表达载体,融合蛋白在E.coli中获得了高效表达.进而制备了负载HLA-A*2402限制性HCMV pp65341-349抗原肽(QYDPVAALF,QYD)的可溶性HLA-A*2402-QYD单体分子和四聚体,获得的四聚体具有与HLA-A24+供者抗原特异性CTL的结合活性,特异性CTL的频率为总CD8+T细胞的0.09%～0.37%.这些结果为进一步研究HLA-A*2402限制性的特异性CTL免疫应答规律奠定基础.
HLA-A*2402是中國人群中最常見的等位基因之一,為研究該基因型人群的人巨細胞病毒(HCMV)特異性細胞毒T細胞(CTL)免疫應答,需要製備負載相應抗原肽的HLA-A*2402四聚體.以RT-PCR方法剋隆HLA-A*2402重鏈基因的cDNA,併構建瞭羧基耑融閤生物素化酶BirA底物肽(BSP)的HLA-A*2402重鏈胞外域融閤蛋白(HLA-A*2402-BSP)的錶達載體,但該載體不能在大腸桿菌(E.coli)中有效錶達HLA-A*2402-BSP融閤蛋白;通過對氨基耑(N耑)區域編碼區的密碼子進行優化,構建瞭同義突變的HLA-A*2402-BSP錶達載體,融閤蛋白在E.coli中穫得瞭高效錶達.進而製備瞭負載HLA-A*2402限製性HCMV pp65341-349抗原肽(QYDPVAALF,QYD)的可溶性HLA-A*2402-QYD單體分子和四聚體,穫得的四聚體具有與HLA-A24+供者抗原特異性CTL的結閤活性,特異性CTL的頻率為總CD8+T細胞的0.09%～0.37%.這些結果為進一步研究HLA-A*2402限製性的特異性CTL免疫應答規律奠定基礎.
HLA-A*2402시중국인군중최상견적등위기인지일,위연구해기인형인군적인거세포병독(HCMV)특이성세포독T세포(CTL)면역응답,수요제비부재상응항원태적HLA-A*2402사취체.이RT-PCR방법극륭HLA-A*2402중련기인적cDNA,병구건료최기단융합생물소화매BirA저물태(BSP)적HLA-A*2402중련포외역융합단백(HLA-A*2402-BSP)적표체재체,단해재체불능재대장간균(E.coli)중유효표체HLA-A*2402-BSP융합단백;통과대안기단(N단)구역편마구적밀마자진행우화,구건료동의돌변적HLA-A*2402-BSP표체재체,융합단백재E.coli중획득료고효표체.진이제비료부재HLA-A*2402한제성HCMV pp65341-349항원태(QYDPVAALF,QYD)적가용성HLA-A*2402-QYD단체분자화사취체,획득적사취체구유여HLA-A24+공자항원특이성CTL적결합활성,특이성CTL적빈솔위총CD8+T세포적0.09%～0.37%.저사결과위진일보연구HLA-A*2402한제성적특이성CTL면역응답규률전정기출.
