CAJ | 학술논문

目的:观察受体SD大鼠骨髓间质干细胞在原位肝移植术后受体内的分布情况,及其对肝功能与生存期的影响.方法:实验于2005-06/2006-06在珠江医院中心实验室完成.①选取30只Wistar大鼠作为供体,30只SD大鼠作为受体,随机数字表法分为假手术组、模型对照组、细胞移植组,10对/组.②另取30只SD大鼠用于骨髓间质干细胞的获取,麻醉后处死,取股骨内骨髓,采用密度梯度离心法与贴壁法分离培养骨髓间质干细胞,3 d后全量换液,第10天传代.取第3代骨髓间质干细胞1 mL(含干细胞约1×107个),用5μmol/L羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂标记10 s,以体积分数为0.1的胎牛血清终止染色.③模型对照组、细胞移植组采用双袖套法建立Wistar→SD大鼠肝移植模型,移植后SD大鼠存活时间大于72 h为造模成功标志.假手术组单纯行腹部切开缝合术.术毕关腹前,假手术组、细胞移植组SD大鼠分别经门静脉注入骨髓间质干细胞悬液1 mL(约1×107个干细胞),模型对照组给予等量DMEM.④各组分别于术后1周、2周、1个月,荧光显微镜下观测经羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂标记的骨髓间质干细胞分布情况;取尾静脉血1 mL,检测谷丙转氨酶及总胆红素含量;免疫组化法检测肝组织免疫排斥反应.同时观测1个月内各组接受肝移植的SD大鼠的存活时间.结果:各组接受肝移植的10只SD大鼠均进入结果分析.①骨髓间质干细胞的原代培养与羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂标记结果:骨髓间质于细胞原代培养48～72 h以圆形和短梭形为主,体外分离培养扩增至第3代较为纯化,经羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂标记后细胞膜呈绿色.②肝组织骨髓间质干细胞的分布:假手术组、模型对照组术后1,2周及1个月肝组织内均未见骨髓间质干细胞分布.细胞移植组各时间点骨髓间质于细胞主要聚集在肝脏.③术后肝功能检测:与模型对照组比较,术后1周、2周、1个月细胞移植组谷丙转氨酶与总胆红素含量均显著降低(F=63.179,P＜0.01).④术后肝组织免疫排斥变化:模型对照组呈重度急性排斥反应,表现为肝细胞索状排列紊乱,汇管区大量炎性细胞浸润.细胞移植组呈轻度急性排斥反应,术后1周可见汇管区中等量单核细胞浸润,术后2周细胞浸润减少,术后1个月肝细胞索状排列整齐,小叶结构清晰,基本恢复正常.⑤术后生存时间观测:与模型对照组比较,细胞移植组植入骨髓间质干细胞后生存时间明显延长,Log-Rank检验差异有显著性意义(F=4.85,P＜0.01).结论:大鼠受体骨髓间质干细胞植入原位肝移植受体内后主要聚集于肝组织,能够较为迅速地恢复受体肝功能,减轻肝组织免疫排斥反应,并有效延长其生存期. 目的:觀察受體SD大鼠骨髓間質榦細胞在原位肝移植術後受體內的分佈情況,及其對肝功能與生存期的影響.方法:實驗于2005-06/2006-06在珠江醫院中心實驗室完成.①選取30隻Wistar大鼠作為供體,30隻SD大鼠作為受體,隨機數字錶法分為假手術組、模型對照組、細胞移植組,10對/組.②另取30隻SD大鼠用于骨髓間質榦細胞的穫取,痳醉後處死,取股骨內骨髓,採用密度梯度離心法與貼壁法分離培養骨髓間質榦細胞,3 d後全量換液,第10天傳代.取第3代骨髓間質榦細胞1 mL(含榦細胞約1×107箇),用5μmol/L羥基熒光素二醋痠鹽琥珀酰亞胺脂標記10 s,以體積分數為0.1的胎牛血清終止染色.③模型對照組、細胞移植組採用雙袖套法建立Wistar→SD大鼠肝移植模型,移植後SD大鼠存活時間大于72 h為造模成功標誌.假手術組單純行腹部切開縫閤術.術畢關腹前,假手術組、細胞移植組SD大鼠分彆經門靜脈註入骨髓間質榦細胞懸液1 mL(約1×107箇榦細胞),模型對照組給予等量DMEM.④各組分彆于術後1週、2週、1箇月,熒光顯微鏡下觀測經羥基熒光素二醋痠鹽琥珀酰亞胺脂標記的骨髓間質榦細胞分佈情況;取尾靜脈血1 mL,檢測穀丙轉氨酶及總膽紅素含量;免疫組化法檢測肝組織免疫排斥反應.同時觀測1箇月內各組接受肝移植的SD大鼠的存活時間.結果:各組接受肝移植的10隻SD大鼠均進入結果分析.①骨髓間質榦細胞的原代培養與羥基熒光素二醋痠鹽琥珀酰亞胺脂標記結果:骨髓間質于細胞原代培養48～72 h以圓形和短梭形為主,體外分離培養擴增至第3代較為純化,經羥基熒光素二醋痠鹽琥珀酰亞胺脂標記後細胞膜呈綠色.②肝組織骨髓間質榦細胞的分佈:假手術組、模型對照組術後1,2週及1箇月肝組織內均未見骨髓間質榦細胞分佈.細胞移植組各時間點骨髓間質于細胞主要聚集在肝髒.③術後肝功能檢測:與模型對照組比較,術後1週、2週、1箇月細胞移植組穀丙轉氨酶與總膽紅素含量均顯著降低(F=63.179,P＜0.01).④術後肝組織免疫排斥變化:模型對照組呈重度急性排斥反應,錶現為肝細胞索狀排列紊亂,彙管區大量炎性細胞浸潤.細胞移植組呈輕度急性排斥反應,術後1週可見彙管區中等量單覈細胞浸潤,術後2週細胞浸潤減少,術後1箇月肝細胞索狀排列整齊,小葉結構清晰,基本恢複正常.⑤術後生存時間觀測:與模型對照組比較,細胞移植組植入骨髓間質榦細胞後生存時間明顯延長,Log-Rank檢驗差異有顯著性意義(F=4.85,P＜0.01).結論:大鼠受體骨髓間質榦細胞植入原位肝移植受體內後主要聚集于肝組織,能夠較為迅速地恢複受體肝功能,減輕肝組織免疫排斥反應,併有效延長其生存期.
목적:관찰수체SD대서골수간질간세포재원위간이식술후수체내적분포정황,급기대간공능여생존기적영향.방법:실험우2005-06/2006-06재주강의원중심실험실완성.①선취30지Wistar대서작위공체,30지SD대서작위수체,수궤수자표법분위가수술조、모형대조조、세포이식조,10대/조.②령취30지SD대서용우골수간질간세포적획취,마취후처사,취고골내골수,채용밀도제도리심법여첩벽법분리배양골수간질간세포,3 d후전량환액,제10천전대.취제3대골수간질간세포1 mL(함간세포약1×107개),용5μmol/L간기형광소이작산염호박선아알지표기10 s,이체적분수위0.1적태우혈청종지염색.③모형대조조、세포이식조채용쌍수투법건립Wistar→SD대서간이식모형,이식후SD대서존활시간대우72 h위조모성공표지.가수술조단순행복부절개봉합술.술필관복전,가수술조、세포이식조SD대서분별경문정맥주입골수간질간세포현액1 mL(약1×107개간세포),모형대조조급여등량DMEM.④각조분별우술후1주、2주、1개월,형광현미경하관측경간기형광소이작산염호박선아알지표기적골수간질간세포분포정황;취미정맥혈1 mL,검측곡병전안매급총담홍소함량;면역조화법검측간조직면역배척반응.동시관측1개월내각조접수간이식적SD대서적존활시간.결과:각조접수간이식적10지SD대서균진입결과분석.①골수간질간세포적원대배양여간기형광소이작산염호박선아알지표기결과:골수간질우세포원대배양48～72 h이원형화단사형위주,체외분리배양확증지제3대교위순화,경간기형광소이작산염호박선아알지표기후세포막정록색.②간조직골수간질간세포적분포:가수술조、모형대조조술후1,2주급1개월간조직내균미견골수간질간세포분포.세포이식조각시간점골수간질우세포주요취집재간장.③술후간공능검측:여모형대조조비교,술후1주、2주、1개월세포이식조곡병전안매여총담홍소함량균현저강저(F=63.179,P＜0.01).④술후간조직면역배척변화:모형대조조정중도급성배척반응,표현위간세포색상배렬문란,회관구대량염성세포침윤.세포이식조정경도급성배척반응,술후1주가견회관구중등량단핵세포침윤,술후2주세포침윤감소,술후1개월간세포색상배렬정제,소협결구청석,기본회복정상.⑤술후생존시간관측:여모형대조조비교,세포이식조식입골수간질간세포후생존시간명현연장,Log-Rank검험차이유현저성의의(F=4.85,P＜0.01).결론:대서수체골수간질간세포식입원위간이식수체내후주요취집우간조직,능구교위신속지회복수체간공능,감경간조직면역배척반응,병유효연장기생존기.