CAJ | 학술논문

研究旨在鉴定两条在非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳中总是伴随杂合子出现的非目的条带.实验切胶回收了目的条带和非目的条带,以此为模板进行第二次PCR扩增,然后将PCR产物按不同组合进行混合并施加不同处理再次进行电泳,另外,人工合成了四条包含该缺失位点的寡核苷酸单链,对条带形成的过程进行了模拟.结果表明以两条非目的条带为模板的第2次PCR产物的电泳结果均有4条带,与杂合子样本4条带的迁移率完全一致,以2条目的条带为模板的第2次PCR产物电泳条带的迁移率分别与其本身保持一致;将以2条目的条带为模板的第2次PCR产物混合并经过变性复性后,其结果出现非目的条带和目的条带,也与杂合子样本4条带的迁移率完全一致,而如果只是简单混合并未经过变性复性处理,其电泳结果只出现目的条带.另外,在利用寡核苷酸单链进行模拟的实验中发现,异源双链迁移率较低,形成了非目的条带,而正常双链迁移率较高,形成目的条带.结果提示,这种与杂合子相伴产生的非目的条带,并不是非特异性扩增的结果,而是由于模板为缺失突变杂合子,在复性过程中,PCR产物中的一部分碱基缺失的正负单链会与不缺失的正负单链发生互补,而在发生碱基缺失的位置,会有突环产生,产生的突环进而导致杂合双链迁移率降低,最终形成了两条迁移率较低的非目的条带.
연구지재감정량조재비변성취병희선알응효전영중총시반수잡합자출현적비목적조대.실험절효회수료목적조대화비목적조대,이차위모판진행제이차PCR확증,연후장PCR산물안불동조합진행혼합병시가불동처리재차진행전영,령외,인공합성료사조포함해결실위점적과핵감산단련,대조대형성적과정진행료모의.결과표명이량조비목적조대위모판적제2차PCR산물적전영결과균유4조대,여잡합자양본4조대적천이솔완전일치,이2조목적조대위모판적제2차PCR산물전영조대적천이솔분별여기본신보지일치;장이2조목적조대위모판적제2차PCR산물혼합병경과변성복성후,기결과출현비목적조대화목적조대,야여잡합자양본4조대적천이솔완전일치,이여과지시간단혼합병미경과변성복성처리,기전영결과지출현목적조대.령외,재이용과핵감산단련진행모의적실험중발현,이원쌍련천이솔교저,형성료비목적조대,이정상쌍련천이솔교고,형성목적조대.결과제시,저충여잡합자상반산생적비목적조대,병불시비특이성확증적결과,이시유우모판위결실돌변잡합자,재복성과정중,PCR산물중적일부분감기결실적정부단련회여불결실적정부단련발생호보,이재발생감기결실적위치,회유돌배산생,산생적돌배진이도치잡합쌍련천이솔강저,최종형성료량조천이솔교저적비목적조대.