中国动物检疫
中國動物檢疫
중국동물검역
CHINA ANMAL QUARANTINE
2010年
6期
28-31
,共4页
张瀚元%左青山%李明义%黄保续
張瀚元%左青山%李明義%黃保續
장한원%좌청산%리명의%황보속
鸭甲肝病毒%鸭瘟病毒%TK基因%VP1基因%重组鸭瘟病毒
鴨甲肝病毒%鴨瘟病毒%TK基因%VP1基因%重組鴨瘟病毒
압갑간병독%압온병독%TK기인%VP1기인%중조압온병독
扩增鸭瘟病毒(DPV)生长非必需区的TK基因,并在其中间引入Bg1Ⅱ酶切位点,再之克隆到pUC19载体,获得载体pTK.用限制性内切酶从已有质粒pcDNA-LacZ上切下CMV启动子、多克隆位点,SV40及LacZ的完整的基因表达盒,插入到pTK的TK基因中,获得质粒pTCL.用质粒T-VP1做模板,扩增出Ⅰ型鸭甲肝病毒(以前称为血清Ⅰ型鸭肝炎病毒)VP1基因,克隆到质粒pTCL表达盒的多克隆位点KpnⅠ与XbaⅠ之间,构建含LacZ及VP1基因的转移载体质粒pT-CL-VP1.将此转移载体与鸭瘟病毒C-KCE毒株共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),经蓝斑克隆筛选和纯化,获得了遗传性状稳定的表达Ⅰ型鸭甲肝病毒VP1基因的重组鸭瘟病毒.
擴增鴨瘟病毒(DPV)生長非必需區的TK基因,併在其中間引入Bg1Ⅱ酶切位點,再之剋隆到pUC19載體,穫得載體pTK.用限製性內切酶從已有質粒pcDNA-LacZ上切下CMV啟動子、多剋隆位點,SV40及LacZ的完整的基因錶達盒,插入到pTK的TK基因中,穫得質粒pTCL.用質粒T-VP1做模闆,擴增齣Ⅰ型鴨甲肝病毒(以前稱為血清Ⅰ型鴨肝炎病毒)VP1基因,剋隆到質粒pTCL錶達盒的多剋隆位點KpnⅠ與XbaⅠ之間,構建含LacZ及VP1基因的轉移載體質粒pT-CL-VP1.將此轉移載體與鴨瘟病毒C-KCE毒株共轉染鷄胚成纖維細胞(CEF),經藍斑剋隆篩選和純化,穫得瞭遺傳性狀穩定的錶達Ⅰ型鴨甲肝病毒VP1基因的重組鴨瘟病毒.
확증압온병독(DPV)생장비필수구적TK기인,병재기중간인입Bg1Ⅱ매절위점,재지극륭도pUC19재체,획득재체pTK.용한제성내절매종이유질립pcDNA-LacZ상절하CMV계동자、다극륭위점,SV40급LacZ적완정적기인표체합,삽입도pTK적TK기인중,획득질립pTCL.용질립T-VP1주모판,확증출Ⅰ형압갑간병독(이전칭위혈청Ⅰ형압간염병독)VP1기인,극륭도질립pTCL표체합적다극륭위점KpnⅠ여XbaⅠ지간,구건함LacZ급VP1기인적전이재체질립pT-CL-VP1.장차전이재체여압온병독C-KCE독주공전염계배성섬유세포(CEF),경람반극륭사선화순화,획득료유전성상은정적표체Ⅰ형압갑간병독VP1기인적중조압온병독.
