共表达猪细小病毒VP2蛋白和猪圆环病毒2型Cap蛋白的重组伪狂犬病毒的构建及其鉴定
공표체저세소병독VP2단백화저원배병독2형Cap단백적중조위광견병독적구건급기감정
Construction and characterization of a recombinant pseudorabies virus expressing VP2 of porcine parvovirus and Cap of porcine circovirus type 2
  • 万方数据
    中国预防兽医学报 중국예방수의학보
    CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
    2012年 4期 251-256 ,共6页

    邓晓辉%陈柳%叶伟成%李军星%崔尚金%余斌%云涛%崔言顺%孙元%仇华吉%张帅%张存

    산효휘%진류%협위성%리군성%최상금%여빈%운도%최언순%손원%구화길%장수%장존

    PRV感染性克隆%细菌人工染色体%猪细小病毒%猪圆环病毒2型 PRV感染性剋隆%細菌人工染色體%豬細小病毒%豬圓環病毒2型
    PRV감염성극륭%세균인공염색체%저세소병독%저원배병독2형
    为研制猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)3联苗,本研究将PPV VP2基因和PCV2 Cap基因通过口蹄疫病毒2A基因串联得到VP2-2A-Cap (V2C)基因,将其插入pEP-CMV-in转移载体构建pEP-V2C-in重组表达质粒,再通过Red/ET两步重组法在大肠杆菌中构建了pPRV-V2C-△gE和pPRV-△gE突变体,该突变体用磷酸钙法转染BHK-21细胞获得重组病毒rPRV-V2C-△gE和rPRV-△gE.Western blot分析表明rPRV-V2C-△gE能够在BHK-21细胞内表达融合蛋白VP2-2A-Cap,而且目的蛋白能够被2A蛋白裂解为64ku和28 ku两个片段.重组病毒生长曲线和噬斑大小测定结果显示rPRV-V2C- △gE在BHK-21细胞中的增殖滴度与亲本株rPRV无显著差异,表明外源基因的插入不影响rPRV的增殖.本研究为PRV、PPV和PCV2 3联重组活载体疫苗的研制奠定了基础.
    위연제저위광견병독(PRV)、저세소병독(PPV)화저원배병독2형(PCV2)3련묘,본연구장PPV VP2기인화PCV2 Cap기인통과구제역병독2A기인천련득도VP2-2A-Cap (V2C)기인,장기삽입pEP-CMV-in전이재체구건pEP-V2C-in중조표체질립,재통과Red/ET량보중조법재대장간균중구건료pPRV-V2C-△gE화pPRV-△gE돌변체,해돌변체용린산개법전염BHK-21세포획득중조병독rPRV-V2C-△gE화rPRV-△gE.Western blot분석표명rPRV-V2C-△gE능구재BHK-21세포내표체융합단백VP2-2A-Cap,이차목적단백능구피2A단백렬해위64ku화28 ku량개편단.중조병독생장곡선화서반대소측정결과현시rPRV-V2C- △gE재BHK-21세포중적증식적도여친본주rPRV무현저차이,표명외원기인적삽입불영향rPRV적증식.본연구위PRV、PPV화PCV2 3련중조활재체역묘적연제전정료기출.
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