微生物学通报
微生物學通報
미생물학통보
MICROBIOLOGY
2006年
5期
35-38
,共4页
卢冬梅%吴英松%解桂秋%高仁钧%王智%曹淑桂%冯雁
盧鼕梅%吳英鬆%解桂鞦%高仁鈞%王智%曹淑桂%馮雁
로동매%오영송%해계추%고인균%왕지%조숙계%풍안
Aeropyrum pernix K1%磷脂酶A2%古细菌%热稳定性
Aeropyrum pernix K1%燐脂酶A2%古細菌%熱穩定性
Aeropyrum pernix K1%린지매A2%고세균%열은정성
从超嗜热需氧古细菌Aeropyrum pernix K1中抽提出染色体基因组,经PCR扩增得到磷脂酶A2基因,用带有His-tag标记的pET15b作为表达载体,在大肠杆菌BLP中成功地诱导表达.表达产物经过Ni-螯合柱一步得到纯化.SDS-PAGE检测只有一条带,其准确分子量为17,871kD.对纯化后的磷脂酶A2测定其酶活性和生物活性,得出其最适反应温度为90℃,最适pH范围为7.8～8.2.至此首次成功地在大肠杆菌中表达了古细菌嗜热磷脂酶A2,这将为以后对该酶的结构和功能以及耐热机制研究打下很好的基础,同时有利于古细菌研究领域的扩展.
從超嗜熱需氧古細菌Aeropyrum pernix K1中抽提齣染色體基因組,經PCR擴增得到燐脂酶A2基因,用帶有His-tag標記的pET15b作為錶達載體,在大腸桿菌BLP中成功地誘導錶達.錶達產物經過Ni-螯閤柱一步得到純化.SDS-PAGE檢測隻有一條帶,其準確分子量為17,871kD.對純化後的燐脂酶A2測定其酶活性和生物活性,得齣其最適反應溫度為90℃,最適pH範圍為7.8～8.2.至此首次成功地在大腸桿菌中錶達瞭古細菌嗜熱燐脂酶A2,這將為以後對該酶的結構和功能以及耐熱機製研究打下很好的基礎,同時有利于古細菌研究領域的擴展.
종초기열수양고세균Aeropyrum pernix K1중추제출염색체기인조,경PCR확증득도린지매A2기인,용대유His-tag표기적pET15b작위표체재체,재대장간균BLP중성공지유도표체.표체산물경과Ni-오합주일보득도순화.SDS-PAGE검측지유일조대,기준학분자량위17,871kD.대순화후적린지매A2측정기매활성화생물활성,득출기최괄반응온도위90℃,최괄pH범위위7.8～8.2.지차수차성공지재대장간균중표체료고세균기열린지매A2,저장위이후대해매적결구화공능이급내열궤제연구타하흔호적기출,동시유리우고세균연구영역적확전.
