中国医药生物技术
中國醫藥生物技術
중국의약생물기술
CHINESE MEDICINAL BIOTECHNOLOGY
2007年
4期
260-265
,共6页
刘建荣%赵晓瑜%步得志%顾雅君%静天玉
劉建榮%趙曉瑜%步得誌%顧雅君%靜天玉
류건영%조효유%보득지%고아군%정천옥
超氧化物歧化酶%重组蛋白质类%培养基%发酵
超氧化物歧化酶%重組蛋白質類%培養基%髮酵
초양화물기화매%중조단백질류%배양기%발효
目的 以国产培养基替代昂贵进口培养基发酵培养重组人超氧化物歧化酶(rhSOD)工程菌.方法 利用国产LB培养基对自行构建的含重组质粒pTK-rhSOD的基因工程菌E.coli DH5α通过摇瓶进行发酵培养,以SDS-PAGE分析方法考察不同菌体接种量(1%～5%)、菌体生长密度[波长600 nm处吸光度(A600)值]、诱导时间(1～8 h)、氨苄青霉素(Amp)浓度(终浓度150、200、250 μg/ml)及加入时机(分别于接种前和诱导前加入)、摇瓶装液量(10%～40%)和诱导温度(42、43、44、45℃)对rhSOD表达的影响,优选最适培养条件,并与进口LB培养基进行比较.结果 对于国产LB培养基,采用3%～5%接种量,菌体密度生长至A600达0.38～0.63,诱导前补加Amp由初始的100 μg/ml至200 μg/ml,于42～44℃诱导3～5 h,rhSOD表达量可达30%;对于进口LB培养基,采用2%接种量,菌体密度生长至A600达0.55～0.93,诱导前补加Amp由初始的100 μg/ml至150 μg/ml,于42～43℃诱导2～4 h,rhSOD表达量可达30%.两种培养基摇瓶装液量对rhSOD的表达均没有明显影响.结论 国产LB培养基经条件优化后可获得与进口培养基相同的 蛋白表达量,可以替代昂贵的进口产品,为rhSOD进一步规模化生产降低发酵成本提供了实验依据.
目的 以國產培養基替代昂貴進口培養基髮酵培養重組人超氧化物歧化酶(rhSOD)工程菌.方法 利用國產LB培養基對自行構建的含重組質粒pTK-rhSOD的基因工程菌E.coli DH5α通過搖瓶進行髮酵培養,以SDS-PAGE分析方法攷察不同菌體接種量(1%～5%)、菌體生長密度[波長600 nm處吸光度(A600)值]、誘導時間(1～8 h)、氨芐青黴素(Amp)濃度(終濃度150、200、250 μg/ml)及加入時機(分彆于接種前和誘導前加入)、搖瓶裝液量(10%～40%)和誘導溫度(42、43、44、45℃)對rhSOD錶達的影響,優選最適培養條件,併與進口LB培養基進行比較.結果 對于國產LB培養基,採用3%～5%接種量,菌體密度生長至A600達0.38～0.63,誘導前補加Amp由初始的100 μg/ml至200 μg/ml,于42～44℃誘導3～5 h,rhSOD錶達量可達30%;對于進口LB培養基,採用2%接種量,菌體密度生長至A600達0.55～0.93,誘導前補加Amp由初始的100 μg/ml至150 μg/ml,于42～43℃誘導2～4 h,rhSOD錶達量可達30%.兩種培養基搖瓶裝液量對rhSOD的錶達均沒有明顯影響.結論 國產LB培養基經條件優化後可穫得與進口培養基相同的 蛋白錶達量,可以替代昂貴的進口產品,為rhSOD進一步規模化生產降低髮酵成本提供瞭實驗依據.
목적 이국산배양기체대앙귀진구배양기발효배양중조인초양화물기화매(rhSOD)공정균.방법 이용국산LB배양기대자행구건적함중조질립pTK-rhSOD적기인공정균E.coli DH5α통과요병진행발효배양,이SDS-PAGE분석방법고찰불동균체접충량(1%～5%)、균체생장밀도[파장600 nm처흡광도(A600)치]、유도시간(1～8 h)、안변청매소(Amp)농도(종농도150、200、250 μg/ml)급가입시궤(분별우접충전화유도전가입)、요병장액량(10%～40%)화유도온도(42、43、44、45℃)대rhSOD표체적영향,우선최괄배양조건,병여진구LB배양기진행비교.결과 대우국산LB배양기,채용3%～5%접충량,균체밀도생장지A600체0.38～0.63,유도전보가Amp유초시적100 μg/ml지200 μg/ml,우42～44℃유도3～5 h,rhSOD표체량가체30%;대우진구LB배양기,채용2%접충량,균체밀도생장지A600체0.55～0.93,유도전보가Amp유초시적100 μg/ml지150 μg/ml,우42～43℃유도2～4 h,rhSOD표체량가체30%.량충배양기요병장액량대rhSOD적표체균몰유명현영향.결론 국산LB배양기경조건우화후가획득여진구배양기상동적 단백표체량,가이체대앙귀적진구산품,위rhSOD진일보규모화생산강저발효성본제공료실험의거.
