江西农业大学学报
江西農業大學學報
강서농업대학학보
ACTA AGRICULTURAE UNIVERSITATIS JIANGXIENSIS
2009年
1期
27-30
,共4页
酵母细胞%鸡法氏囊B细胞%cDNA文库%SMART技术
酵母細胞%鷄法氏囊B細胞%cDNA文庫%SMART技術
효모세포%계법씨낭B세포%cDNA문고%SMART기술
以酵母穿梭表达质粒pGADT72Ree为载体,采用CLONTECH SMART(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)技术,在酵母细胞中构建鸡法氏囊B细胞的酵母双杂交cDNA文库.通过从分离的鸡法氏囊B细胞中提取总RNA,利用经修饰的CDS引物合成cDNA第一链,在链的末端可自动延伸CCC,在反应体系中加入SMART ⅢTM Oligo作为cDNA第二链合成的引物,进行长距离(LD)2PCR合成双链cDNA,后者经CLONTECH CHROMA SPIN+TE24000柱纯化后,与线性质粒pGADT72Rec共转化感受态酵母菌AH109,二者在酵母细胞中利用酵母细胞内具有较高的同源重组酶活性,进行同源重组成环行的有复制活性的文库质粒,在缺亮氨酸(LEU)培养板上筛选出所有克隆,即为鸡法氏囊B细胞的酵母双杂交cDNA文库.结果:共获得2.2×106转化子,文库扩增后,插入cDNA长度在0.5～3 kb.研究结论表明可在酵母细胞中利用CLONTECH SMART技术成功构建鸡法氏囊B细胞的酵母双杂交cDNA文库.
以酵母穿梭錶達質粒pGADT72Ree為載體,採用CLONTECH SMART(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)技術,在酵母細胞中構建鷄法氏囊B細胞的酵母雙雜交cDNA文庫.通過從分離的鷄法氏囊B細胞中提取總RNA,利用經脩飾的CDS引物閤成cDNA第一鏈,在鏈的末耑可自動延伸CCC,在反應體繫中加入SMART ⅢTM Oligo作為cDNA第二鏈閤成的引物,進行長距離(LD)2PCR閤成雙鏈cDNA,後者經CLONTECH CHROMA SPIN+TE24000柱純化後,與線性質粒pGADT72Rec共轉化感受態酵母菌AH109,二者在酵母細胞中利用酵母細胞內具有較高的同源重組酶活性,進行同源重組成環行的有複製活性的文庫質粒,在缺亮氨痠(LEU)培養闆上篩選齣所有剋隆,即為鷄法氏囊B細胞的酵母雙雜交cDNA文庫.結果:共穫得2.2×106轉化子,文庫擴增後,插入cDNA長度在0.5～3 kb.研究結論錶明可在酵母細胞中利用CLONTECH SMART技術成功構建鷄法氏囊B細胞的酵母雙雜交cDNA文庫.
이효모천사표체질립pGADT72Ree위재체,채용CLONTECH SMART(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)기술,재효모세포중구건계법씨낭B세포적효모쌍잡교cDNA문고.통과종분리적계법씨낭B세포중제취총RNA,이용경수식적CDS인물합성cDNA제일련,재련적말단가자동연신CCC,재반응체계중가입SMART ⅢTM Oligo작위cDNA제이련합성적인물,진행장거리(LD)2PCR합성쌍련cDNA,후자경CLONTECH CHROMA SPIN+TE24000주순화후,여선성질립pGADT72Rec공전화감수태효모균AH109,이자재효모세포중이용효모세포내구유교고적동원중조매활성,진행동원중조성배행적유복제활성적문고질립,재결량안산(LEU)배양판상사선출소유극륭,즉위계법씨낭B세포적효모쌍잡교cDNA문고.결과:공획득2.2×106전화자,문고확증후,삽입cDNA장도재0.5～3 kb.연구결론표명가재효모세포중이용CLONTECH SMART기술성공구건계법씨낭B세포적효모쌍잡교cDNA문고.
