CAJ | 학술논문

目的:用RNA干扰技术(RNA interference, RNAi)选择性下调大鼠心肌细胞上乌苷酸结合蛋白(Gs)α亚基(Gs protein alphala subunit, Gsα)的表达,筛选出抑制Gsα蛋白效果最明显的特异短发夹RNA(short hairpin RNA, shRNA)表达质粒.方法:构建3条靶向gnas基因的特异与RNA质粒载体(shRNA1-3),以含非特异性shRNA编码序列的质粒载体为阴性对照(HK),用脂质体LipofectamineTM LTX & PLUS转染原代培养的大鼠心肌细胞,并设空白对照组,转染后通过半定量RT-PCR和Western blot法检测Gsα mRNA和蛋白的表达情况,以内参照三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)进行标化.结果:shRNA1-3均使Gsα的mRNA和蛋白质表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.01),且shRNA3的抑制效果最显著,阴性对照质粒组与空白对照组Gsα表达差异无统计学意义.结论:利用RNAi技术成功下调了原代培养的心肌细胞中Gsα的表达,并筛选出沉默效果最明显的shRNA真核表达质粒,为心肌细胞的转染提供了可行的方法.
목적:용RNA간우기술(RNA interference, RNAi)선택성하조대서심기세포상오감산결합단백(Gs)α아기(Gs protein alphala subunit, Gsα)적표체,사선출억제Gsα단백효과최명현적특이단발협RNA(short hairpin RNA, shRNA)표체질립.방법:구건3조파향gnas기인적특이여RNA질립재체(shRNA1-3),이함비특이성shRNA편마서렬적질립재체위음성대조(HK),용지질체LipofectamineTM LTX & PLUS전염원대배양적대서심기세포,병설공백대조조,전염후통과반정량RT-PCR화Western blot법검측Gsα mRNA화단백적표체정황,이내삼조삼린산감유철탈경매(GAPDH)진행표화.결과:shRNA1-3균사Gsα적mRNA화단백질표체명현강저,차이유통계학의의(P<0.01),차shRNA3적억제효과최현저,음성대조질립조여공백대조조Gsα표체차이무통계학의의.결론:이용RNAi기술성공하조료원대배양적심기세포중Gsα적표체,병사선출침묵효과최명현적shRNA진핵표체질립,위심기세포적전염제공료가행적방법.