端粒酶hTERT亚单位启动子靶向性慢病毒对肿瘤活体实时显像的实验研究
단립매hTERT아단위계동자파향성만병독대종류활체실시현상적실험연구
An Optimized Telomerase-specific Lentivirus For Tumor Real-time Noninvasive Imaging
  • 万方数据
    实用临床医药杂志 실용림상의약잡지
    JOURNAL OF JIANGSU CLINICAL MEDICINE
    2010年 5期 4-12 ,共9页

    余松涛%杨应斌%史春梦%陈陵%汤旭东%黎川%师红磊%李长珠%李宁%王国珍%吴玉云%房殿春%杨仕明

    여송도%양응빈%사춘몽%진릉%탕욱동%려천%사홍뢰%리장주%리저%왕국진%오옥운%방전춘%양사명

    分子显像%报告基因%端粒酶催化亚单位(hTERT)%启动子%慢病毒 分子顯像%報告基因%耑粒酶催化亞單位(hTERT)%啟動子%慢病毒
    분자현상%보고기인%단립매최화아단위(hTERT)%계동자%만병독
    目的 构建一种含优化型人端粒酶催化亚单位(hTERT)启动子的慢病毒,结合小动物活体光学成像系统,研究该启动子对端粒酶阳性肿瘤的特异性活体成像作用.方法 将文献报道的优化型hTERT启动子克隆到pGL-Basic质粒,对优化型hTERT启动子进行功能检测.确定其驱动活性之后,构建一种含该启动子和GFP的第3代慢病毒表达系统,以含CMV启动子的慢病毒作为对照.采用小动物荧光成像系统体内外研究优化型hTERT启动子在肿瘤实时诊断中的作用.结果 启动子功能检测发现hTERT启动子具有严格的端粒酶阳性肿瘤细胞特异性,并且具有很高的报告基因报答水平.第3代慢病毒包装系统获得了高滴度的病毒颗粒并且能高效整合报告基因之宿主细胞.体外研究表明,含有优化型hTERT启动子的慢病毒体外感染细胞后,能够在端粒酶阳性肿瘤细胞内特异表达GFP, 并且能维持长达40 d的报告基因表达时间.体内实验发现,感染含优化型hTERT启动子的慢病毒之后24 h, 端粒酶阳性活体肿瘤能够被特异性的实时观察到,并且肿瘤内的GFP信号在存活裸鼠体内维持30 d, 随肿瘤增大而增强.结论 优化后hTERT启动子对报告基因的调控具有严格的端粒酶特异性,第3代慢病毒系统可将该启动子和报告基因整合至细胞基因组,并实现在端粒酶阳性肿瘤细胞内的特异表达.结合小动物活体光学成像系统,荷瘤裸鼠内的端粒酶阳性肿瘤能够被无创的、实时的、特异性的成像,为肿瘤的特异性早期诊断提供新的实验理论基础.
    목적 구건일충함우화형인단립매최화아단위(hTERT)계동자적만병독,결합소동물활체광학성상계통,연구해계동자대단립매양성종류적특이성활체성상작용.방법 장문헌보도적우화형hTERT계동자극륭도pGL-Basic질립,대우화형hTERT계동자진행공능검측.학정기구동활성지후,구건일충함해계동자화GFP적제3대만병독표체계통,이함CMV계동자적만병독작위대조.채용소동물형광성상계통체내외연구우화형hTERT계동자재종류실시진단중적작용.결과 계동자공능검측발현hTERT계동자구유엄격적단립매양성종류세포특이성,병차구유흔고적보고기인보답수평.제3대만병독포장계통획득료고적도적병독과립병차능고효정합보고기인지숙주세포.체외연구표명,함유우화형hTERT계동자적만병독체외감염세포후,능구재단립매양성종류세포내특이표체GFP, 병차능유지장체40 d적보고기인표체시간.체내실험발현,감염함우화형hTERT계동자적만병독지후24 h, 단립매양성활체종류능구피특이성적실시관찰도,병차종류내적GFP신호재존활라서체내유지30 d, 수종류증대이증강.결론 우화후hTERT계동자대보고기인적조공구유엄격적단립매특이성,제3대만병독계통가장해계동자화보고기인정합지세포기인조,병실현재단립매양성종류세포내적특이표체.결합소동물활체광학성상계통,하류라서내적단립매양성종류능구피무창적、실시적、특이성적성상,위종류적특이성조기진단제공신적실험이론기출.
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