农学学报
農學學報
농학학보
Chinese Countryside Well-off Technology
2011年
4期
14-21
,共8页
李娟玲%刘国民%曹嵩晓%罗轶奇
李娟玲%劉國民%曹嵩曉%囉軼奇
리연령%류국민%조숭효%라질기
鹧鸪茶%RAPD%影响因子%体系优化
鷓鴣茶%RAPD%影響因子%體繫優化
자고다%RAPD%영향인자%체계우화
为了建立鹧鸪茶RAPD-PCR的优化反应体系,首先通过单因素试验选定其各影响因子比较适宜的浓度范围,再利用正交试验设计方法,对影响鹧鸪茶RAPD-PCR反应的5种因素进行4水平优化试验.并运用SAS软件对试验结果进行了分析,最后确定优化的RAPD-PCR反应体系为:10×Buffer缓冲液2.5μL+Mg2+2.5 mmol/L+dNTPs 0.2 mmol/L+Taq DNA聚合酶1.5 U+S28引物0.48 mm01/L+ 80 ng模板,定容至25μL.PCR扩增程序为:94℃预变性4 min,然后按94℃变性30 s,38℃退火45 s,72℃延伸120 s,进行45个循环,最后72℃延伸10 min;16℃保存.该优化的RAPD-PCR反应体系具有良好的稳定性和重现性,可应用于鹧鸪茶不同居群间亲缘关系和遗传多样性分析.
為瞭建立鷓鴣茶RAPD-PCR的優化反應體繫,首先通過單因素試驗選定其各影響因子比較適宜的濃度範圍,再利用正交試驗設計方法,對影響鷓鴣茶RAPD-PCR反應的5種因素進行4水平優化試驗.併運用SAS軟件對試驗結果進行瞭分析,最後確定優化的RAPD-PCR反應體繫為:10×Buffer緩遲液2.5μL+Mg2+2.5 mmol/L+dNTPs 0.2 mmol/L+Taq DNA聚閤酶1.5 U+S28引物0.48 mm01/L+ 80 ng模闆,定容至25μL.PCR擴增程序為:94℃預變性4 min,然後按94℃變性30 s,38℃退火45 s,72℃延伸120 s,進行45箇循環,最後72℃延伸10 min;16℃保存.該優化的RAPD-PCR反應體繫具有良好的穩定性和重現性,可應用于鷓鴣茶不同居群間親緣關繫和遺傳多樣性分析.
위료건립자고다RAPD-PCR적우화반응체계,수선통과단인소시험선정기각영향인자비교괄의적농도범위,재이용정교시험설계방법,대영향자고다RAPD-PCR반응적5충인소진행4수평우화시험.병운용SAS연건대시험결과진행료분석,최후학정우화적RAPD-PCR반응체계위:10×Buffer완충액2.5μL+Mg2+2.5 mmol/L+dNTPs 0.2 mmol/L+Taq DNA취합매1.5 U+S28인물0.48 mm01/L+ 80 ng모판,정용지25μL.PCR확증정서위:94℃예변성4 min,연후안94℃변성30 s,38℃퇴화45 s,72℃연신120 s,진행45개순배,최후72℃연신10 min;16℃보존.해우화적RAPD-PCR반응체계구유량호적은정성화중현성,가응용우자고다불동거군간친연관계화유전다양성분석.
