CAJ | 학술논문

目的研究联合应用基因敲除及RNA干扰(siRNA)技术对猪α 1,3半乳糖转移酶(α 1,3GT)基因修饰后,阳性猪杂合子(+/)肝细胞的G T基因是否获得有效沉默并影响人天然抗体介导的细胞毒性作用.方法用pPNTloxPneo和pMXSV/U6载体构建猪GT基因敲除并siRNA载体,转染中国实验用小型猪的肝细胞,筛选获取杂合子克隆(+/).Northern blot检测GT mRNA表达,四甲基偶氮唑盐方法评估天然抗体细胞毒性.结果野生型和pPNTloxPGT转染的杂合子猪肝细胞的mRNA表达阳性,而pPNTloxPGTsiRNA载体转染的杂合猪肝细胞阴性表达α 1,3 GT mRNA;pPNTloxPGT转染细胞(+/-)和野生型(+/+)猪肝细胞对人天然抗体介导的细胞毒性实验敏感,而pPNTloxPGTsiRNA转染细胞(+/-)则对毒性试验敏感性明显下降,只检测到17%细胞毒性.结论对猪GT联合应用基因敲除及siRNA能够在阳性猪杂合子肝细胞内有效沉默G T基因,降低猪肝细胞对人天然抗体细胞毒的敏感性.
목적연구연합응용기인고제급RNA간우(siRNA)기술대저α 1,3반유당전이매(α 1,3GT)기인수식후,양성저잡합자(+/)간세포적G T기인시부획득유효침묵병영향인천연항체개도적세포독성작용.방법용pPNTloxPneo화pMXSV/U6재체구건저GT기인고제병siRNA재체,전염중국실험용소형저적간세포,사선획취잡합자극륭(+/).Northern blot검측GT mRNA표체,사갑기우담서염방법평고천연항체세포독성.결과야생형화pPNTloxPGT전염적잡합자저간세포적mRNA표체양성,이pPNTloxPGTsiRNA재체전염적잡합저간세포음성표체α 1,3 GT mRNA;pPNTloxPGT전염세포(+/-)화야생형(+/+)저간세포대인천연항체개도적세포독성실험민감,이pPNTloxPGTsiRNA전염세포(+/-)칙대독성시험민감성명현하강,지검측도17%세포독성.결론대저GT연합응용기인고제급siRNA능구재양성저잡합자간세포내유효침묵G T기인,강저저간세포대인천연항체세포독적민감성.