首都医科大学学报
首都醫科大學學報
수도의과대학학보
JOURNAL OF CAPITAL UNIVERSITY OF MEDICAL SCIENCES
2004年
1期
35-39
,共5页
丛敏%靖学芳%刘振龙%孙明洁%安云庆
叢敏%靖學芳%劉振龍%孫明潔%安雲慶
총민%정학방%류진룡%손명길%안운경
杀菌/渗透增强蛋白%rBPIm23重组抗菌蛋白%表达载体%巴斯德毕赤酵母
殺菌/滲透增彊蛋白%rBPIm23重組抗菌蛋白%錶達載體%巴斯德畢赤酵母
살균/삼투증강단백%rBPIm23중조항균단백%표체재체%파사덕필적효모
为使rBPIm23重组抗菌蛋白在毕赤酵母表达系统中分泌表达,拟构建synBPIm600酵母表达载体.以pUC18-synBPI414质粒为模板扩增synBPI200基因片段,经XhoI/EcoRI双酶切获得synBPI185 bp基因片段;EcoRI/SalI双酶切PBV220-BPIm600质粒获得BPIm420基因片段;将上述2个基因片段连接后定向克隆到pPICZα酵母表达载体上.连接产物转化E.coli TOP 10 F',在含Zeocin的低盐LB固体培养基上筛选阳性转化子.阳性克隆菌经菌落PCR法鉴定、酶切分析和测序鉴定,结果与预期相符.提示:成功构建了pPICZα-synBPIm600酵母表达载体.
為使rBPIm23重組抗菌蛋白在畢赤酵母錶達繫統中分泌錶達,擬構建synBPIm600酵母錶達載體.以pUC18-synBPI414質粒為模闆擴增synBPI200基因片段,經XhoI/EcoRI雙酶切穫得synBPI185 bp基因片段;EcoRI/SalI雙酶切PBV220-BPIm600質粒穫得BPIm420基因片段;將上述2箇基因片段連接後定嚮剋隆到pPICZα酵母錶達載體上.連接產物轉化E.coli TOP 10 F',在含Zeocin的低鹽LB固體培養基上篩選暘性轉化子.暘性剋隆菌經菌落PCR法鑒定、酶切分析和測序鑒定,結果與預期相符.提示:成功構建瞭pPICZα-synBPIm600酵母錶達載體.
위사rBPIm23중조항균단백재필적효모표체계통중분비표체,의구건synBPIm600효모표체재체.이pUC18-synBPI414질립위모판확증synBPI200기인편단,경XhoI/EcoRI쌍매절획득synBPI185 bp기인편단;EcoRI/SalI쌍매절PBV220-BPIm600질립획득BPIm420기인편단;장상술2개기인편단련접후정향극륭도pPICZα효모표체재체상.련접산물전화E.coli TOP 10 F',재함Zeocin적저염LB고체배양기상사선양성전화자.양성극륭균경균락PCR법감정、매절분석화측서감정,결과여예기상부.제시:성공구건료pPICZα-synBPIm600효모표체재체.
