CAJ | 학술논문

以pcDNA3.1-pIL-18为模板,采用PCR技术扩增到了猪白细胞介素18(IL-18)的成熟蛋白基因,通过Kpn Ⅰ+SacⅠ双酶切及连接反应,构建了pET32c-pIL-18原核表达质粒.经过限制性内切酶分析、PCR鉴定及DNA序列测定证实,重组质粒中的基因片段连接正确.之后,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),于37℃、1.0 mmol/L IPTG条件下诱导表达.菌体裂解产物经SDS-PAGE分析,在分子质量约为33 ku处出现了预期的目的蛋白.用8 mol/L脲对表达产物变性,经Ni2+-NTA柱纯化,透析复性,得到了纯化的IL-18蛋白.Western-blot分析证实,纯化的重组IL-18蛋白具有反应活性.上述研究结果为重组IL-18的应用奠定了基础.
이pcDNA3.1-pIL-18위모판,채용PCR기술확증도료저백세포개소18(IL-18)적성숙단백기인,통과Kpn Ⅰ+SacⅠ쌍매절급련접반응,구건료pET32c-pIL-18원핵표체질립.경과한제성내절매분석、PCR감정급DNA서렬측정증실,중조질립중적기인편단련접정학.지후,중조질립전화대장간균BL21(DE3),우37℃、1.0 mmol/L IPTG조건하유도표체.균체렬해산물경SDS-PAGE분석,재분자질량약위33 ku처출현료예기적목적단백.용8 mol/L뇨대표체산물변성,경Ni2+-NTA주순화,투석복성,득도료순화적IL-18단백.Western-blot분석증실,순화적중조IL-18단백구유반응활성.상술연구결과위중조IL-18적응용전정료기출.