CAJ | 학술논문

以PPV VP2为基础,利用重叠延伸PCR技术分别将VP2蛋白中第402位(A)和214位(B)的半胱氨酸突变为精氨酸,并将突变体克隆入pMD19-T Simple载体中;经酶切、PCR和测序鉴定后,利用KpnⅠ和BamHⅠ酶切位点,定向克隆入真核表达载体pPI-2.EGFP中,构建突变体与报告基因EGFP融合表达的pPI-2.EGFP.VP2(A)和pPI-2.EGFP.VP2(B)真核表达载体;利用脂质体法将重组质粒分别转染COS-7细胞.结果:成功构建了突变体的真核表达载体;在转染后的荧光观察中发现,pPI-2.EGFP.VP2(A)和pPI-2.EGFP.VP2(B)质粒转染细胞后,两者表达后的荧光信号不同,A样品的荧光呈颗粒状分布于细胞中,而B样品的荧光信号均匀分布于细胞中.提示,突变是引起表达差异的主要原因.
이PPV VP2위기출,이용중첩연신PCR기술분별장VP2단백중제402위(A)화214위(B)적반광안산돌변위정안산,병장돌변체극륭입pMD19-T Simple재체중;경매절、PCR화측서감정후,이용KpnⅠ화BamHⅠ매절위점,정향극륭입진핵표체재체pPI-2.EGFP중,구건돌변체여보고기인EGFP융합표체적pPI-2.EGFP.VP2(A)화pPI-2.EGFP.VP2(B)진핵표체재체;이용지질체법장중조질립분별전염COS-7세포.결과:성공구건료돌변체적진핵표체재체;재전염후적형광관찰중발현,pPI-2.EGFP.VP2(A)화pPI-2.EGFP.VP2(B)질립전염세포후,량자표체후적형광신호불동,A양품적형광정과립상분포우세포중,이B양품적형광신호균균분포우세포중.제시,돌변시인기표체차이적주요원인.