棉花学报
棉花學報
면화학보
COTTON SCIENCE
2009年
3期
236-242
,共7页
范小平%范博红%徐子勤%杨维才
範小平%範博紅%徐子勤%楊維纔
범소평%범박홍%서자근%양유재
棉花%纤维素合酶%基因克隆%载体构建
棉花%纖維素閤酶%基因剋隆%載體構建
면화%섬유소합매%기인극륭%재체구건
根据GeneBank 中GhcelA1(U58283)序列,利用RT-PCR技术,从棉纤维中克隆到GhcelA1 cDNA全长.运用基因重组技术,构建pCAM2300-35S-GhcelA1过表达载体;融合基因表达载体pCAM2300-35S-GhcelA1-EGFP,以及pCAM2300-35S-GhcelA1-RNAi载体,这些载体均通过限制性酶切鉴定和测序验证.农杆菌介导法将融合基因转化棉花子叶,通过激光共聚焦荧光显微镜,在蓝色激发光下观察诱导的愈伤,发现在转化的活体细胞核与质膜内侧有绿色荧光,说明融合基因载体EGFP构建正确,可以在棉花中正常表达.所构建的系列载体可用于转化棉花,促进纤维素在棉纤维中合成与积累.
根據GeneBank 中GhcelA1(U58283)序列,利用RT-PCR技術,從棉纖維中剋隆到GhcelA1 cDNA全長.運用基因重組技術,構建pCAM2300-35S-GhcelA1過錶達載體;融閤基因錶達載體pCAM2300-35S-GhcelA1-EGFP,以及pCAM2300-35S-GhcelA1-RNAi載體,這些載體均通過限製性酶切鑒定和測序驗證.農桿菌介導法將融閤基因轉化棉花子葉,通過激光共聚焦熒光顯微鏡,在藍色激髮光下觀察誘導的愈傷,髮現在轉化的活體細胞覈與質膜內側有綠色熒光,說明融閤基因載體EGFP構建正確,可以在棉花中正常錶達.所構建的繫列載體可用于轉化棉花,促進纖維素在棉纖維中閤成與積纍.
근거GeneBank 중GhcelA1(U58283)서렬,이용RT-PCR기술,종면섬유중극륭도GhcelA1 cDNA전장.운용기인중조기술,구건pCAM2300-35S-GhcelA1과표체재체;융합기인표체재체pCAM2300-35S-GhcelA1-EGFP,이급pCAM2300-35S-GhcelA1-RNAi재체,저사재체균통과한제성매절감정화측서험증.농간균개도법장융합기인전화면화자협,통과격광공취초형광현미경,재람색격발광하관찰유도적유상,발현재전화적활체세포핵여질막내측유록색형광,설명융합기인재체EGFP구건정학,가이재면화중정상표체.소구건적계렬재체가용우전화면화,촉진섬유소재면섬유중합성여적루.
