北京农学院学报
北京農學院學報
북경농학원학보
JOURNAL OF BEIJING AGRICULTURAL COLLEGE
2011年
3期
8-10
,共3页
刘青%董银行%卢冬%李春丽%沈元月
劉青%董銀行%盧鼕%李春麗%瀋元月
류청%동은행%로동%리춘려%침원월
桃果实%脱落酸受体ABAR/CHLH%原核表达、纯化与复性
桃果實%脫落痠受體ABAR/CHLH%原覈錶達、純化與複性
도과실%탈락산수체ABAR/CHLH%원핵표체、순화여복성
为了剖析桃果实中脱落酸受体ABAR/CHLH蛋白的结合活性,从桃果实中提取总RNA,采用RT-PCR方法,以桃果实RNA逆转录的cDNA为模板,扩增出ABAR/CHLH基因的结合区功能片段C369,回收目的片段并测序,基因片段长度为1 121 bp,编码369个氨基酸残基,分子量约为40 kD.利用BamH Ⅰ和Not I酶切位点将该片段编码区插入原核表达载体pET-28a(+)中,构建ABAR/CHLH基因片段原核表达载体pET28a-C369,经菌落PCR和测序确证后,转化E.coli Rosetta(DE3),通过IPTG诱导其表达His-CHLH融合蛋白.通过SDS-PAGE检测及Ni-NTA琼脂糖树脂亲和层析柱纯化目的蛋白,并用纯化复性的His-CHLH C369融合蛋白制备抗体.
為瞭剖析桃果實中脫落痠受體ABAR/CHLH蛋白的結閤活性,從桃果實中提取總RNA,採用RT-PCR方法,以桃果實RNA逆轉錄的cDNA為模闆,擴增齣ABAR/CHLH基因的結閤區功能片段C369,迴收目的片段併測序,基因片段長度為1 121 bp,編碼369箇氨基痠殘基,分子量約為40 kD.利用BamH Ⅰ和Not I酶切位點將該片段編碼區插入原覈錶達載體pET-28a(+)中,構建ABAR/CHLH基因片段原覈錶達載體pET28a-C369,經菌落PCR和測序確證後,轉化E.coli Rosetta(DE3),通過IPTG誘導其錶達His-CHLH融閤蛋白.通過SDS-PAGE檢測及Ni-NTA瓊脂糖樹脂親和層析柱純化目的蛋白,併用純化複性的His-CHLH C369融閤蛋白製備抗體.
위료부석도과실중탈락산수체ABAR/CHLH단백적결합활성,종도과실중제취총RNA,채용RT-PCR방법,이도과실RNA역전록적cDNA위모판,확증출ABAR/CHLH기인적결합구공능편단C369,회수목적편단병측서,기인편단장도위1 121 bp,편마369개안기산잔기,분자량약위40 kD.이용BamH Ⅰ화Not I매절위점장해편단편마구삽입원핵표체재체pET-28a(+)중,구건ABAR/CHLH기인편단원핵표체재체pET28a-C369,경균락PCR화측서학증후,전화E.coli Rosetta(DE3),통과IPTG유도기표체His-CHLH융합단백.통과SDS-PAGE검측급Ni-NTA경지당수지친화층석주순화목적단백,병용순화복성적His-CHLH C369융합단백제비항체.
