中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2007年
1期
45-50
,共6页
LAPTM4β%核心启动子%凝胶阻滞电泳%转录因子SP1
LAPTM4β%覈心啟動子%凝膠阻滯電泳%轉錄因子SP1
LAPTM4β%핵심계동자%응효조체전영%전록인자SP1
研究在溶酶体相关4次跨膜蛋白(lysosome associated protein transmembrane 4 beta,LAPTM4β)基因启动子区起重要调控作用的转录因子,为进一步揭示LAPTM4β在肝癌高表达的机制提供理论基础.采用报告基因重组体转染肝癌相关细胞系HepG2细胞和荧光素酶活性测定的方法.确定LAPTM4β的核心启动子区,然后应用凝胶阻滞电泳的方法验证在LAPTM4β核心启动子区起调控作用的转录因子及其特异性.LAPTM4β基因6种不同长度的启动子报告基因重组体,转染肝癌细胞系HepG2.荧光素酶活性比较发现,位于转录起始点上游558 bp的一段DNA(PF3)的启动活性最强,表明在这段序列中存在着重要的转录因子结合位点.通过检索Object-oriented Transcriptior Factors Database数据库发现,此段启动子序列中含有多种潜在的转录因子结合位点,其中包括1个SP1结合位点.应用凝胶阻滞电泳(electrophoretic mobility shift assay)的方法,证明人肝细胞癌细胞系HepG2及SMMC7721细胞核提取物均能与包含SP1结合位点的寡核苷酸探针结合,并且这种结合可以被相应50倍或者100倍非标记探针竞争抑制.以上结果表明,位于转录起始点上游558 bp的一段DNA(PF3)是LAPTM4β基因的核心启动子;而核心启动子序列中的转录因子SP1结合位点具有与肝癌相关细胞系的细胞核蛋白结合的活性.
研究在溶酶體相關4次跨膜蛋白(lysosome associated protein transmembrane 4 beta,LAPTM4β)基因啟動子區起重要調控作用的轉錄因子,為進一步揭示LAPTM4β在肝癌高錶達的機製提供理論基礎.採用報告基因重組體轉染肝癌相關細胞繫HepG2細胞和熒光素酶活性測定的方法.確定LAPTM4β的覈心啟動子區,然後應用凝膠阻滯電泳的方法驗證在LAPTM4β覈心啟動子區起調控作用的轉錄因子及其特異性.LAPTM4β基因6種不同長度的啟動子報告基因重組體,轉染肝癌細胞繫HepG2.熒光素酶活性比較髮現,位于轉錄起始點上遊558 bp的一段DNA(PF3)的啟動活性最彊,錶明在這段序列中存在著重要的轉錄因子結閤位點.通過檢索Object-oriented Transcriptior Factors Database數據庫髮現,此段啟動子序列中含有多種潛在的轉錄因子結閤位點,其中包括1箇SP1結閤位點.應用凝膠阻滯電泳(electrophoretic mobility shift assay)的方法,證明人肝細胞癌細胞繫HepG2及SMMC7721細胞覈提取物均能與包含SP1結閤位點的寡覈苷痠探針結閤,併且這種結閤可以被相應50倍或者100倍非標記探針競爭抑製.以上結果錶明,位于轉錄起始點上遊558 bp的一段DNA(PF3)是LAPTM4β基因的覈心啟動子;而覈心啟動子序列中的轉錄因子SP1結閤位點具有與肝癌相關細胞繫的細胞覈蛋白結閤的活性.
연구재용매체상관4차과막단백(lysosome associated protein transmembrane 4 beta,LAPTM4β)기인계동자구기중요조공작용적전록인자,위진일보게시LAPTM4β재간암고표체적궤제제공이론기출.채용보고기인중조체전염간암상관세포계HepG2세포화형광소매활성측정적방법.학정LAPTM4β적핵심계동자구,연후응용응효조체전영적방법험증재LAPTM4β핵심계동자구기조공작용적전록인자급기특이성.LAPTM4β기인6충불동장도적계동자보고기인중조체,전염간암세포계HepG2.형광소매활성비교발현,위우전록기시점상유558 bp적일단DNA(PF3)적계동활성최강,표명재저단서렬중존재착중요적전록인자결합위점.통과검색Object-oriented Transcriptior Factors Database수거고발현,차단계동자서렬중함유다충잠재적전록인자결합위점,기중포괄1개SP1결합위점.응용응효조체전영(electrophoretic mobility shift assay)적방법,증명인간세포암세포계HepG2급SMMC7721세포핵제취물균능여포함SP1결합위점적과핵감산탐침결합,병차저충결합가이피상응50배혹자100배비표기탐침경쟁억제.이상결과표명,위우전록기시점상유558 bp적일단DNA(PF3)시LAPTM4β기인적핵심계동자;이핵심계동자서렬중적전록인자SP1결합위점구유여간암상관세포계적세포핵단백결합적활성.
