酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-PML-V的构建、表达及鉴定
효모쌍잡교유이재체pGBKT7-PML-V적구건、표체급감정
Construction,expression and identification of yeast two-hybrid bait vector pGBKT7-PML-V
  • 万方数据
    重庆医科大学学报 중경의과대학학보
    UNIVERSITATIS SCIENTIAE MEDICINAE CHONGQING
    2008年 3期 257-260 ,共4页

    钟梁%王翀%刘北忠%王东生%郝坡%刘畅%金丹婷%王春光

    종량%왕충%류북충%왕동생%학파%류창%금단정%왕춘광

    PML变异蛋白%质粒构建%诱饵蛋白 PML變異蛋白%質粒構建%誘餌蛋白
    PML변이단백%질립구건%유이단백
    目的:构建早幼粒细胞白血病基因变异蛋白(Promyelocytie leukemia,PML-V)的诱饵表达载体,为应用酵母双杂交系统(Yeast two-hybrid system)筛选与PML-V相互作用的蛋白建立实验基础.方法:PCR扩增PML-V,克隆人诱饵载体pGBKT7中,经测序鉴定后,将构建好的诱饵载体pGBKT7-PML-V转化到酵母细胞AH109中,并利用蛋白印迹法(Western Blotting)分析诱饵蛋白的表达情况.同时检测诱饵蛋白有无毒性、渗漏和自激活作用.结果:成功扩增了PML-V基因片断,并克隆人pGBKT7中,测序结果正确.诱饵载体成功转化到酵母细胞AH109中,诱饵蛋白无毒性、渗漏和自激活作用,Western Blotting分析证实酵母细胞表达诱饵蛋白.结论:成功构建了PML-V结合域的酵母诱饵表达载体,为进一步运用酵母双杂交技术筛选与之相互作用的蛋白奠定了基础.
    목적:구건조유립세포백혈병기인변이단백(Promyelocytie leukemia,PML-V)적유이표체재체,위응용효모쌍잡교계통(Yeast two-hybrid system)사선여PML-V상호작용적단백건립실험기출.방법:PCR확증PML-V,극륭인유이재체pGBKT7중,경측서감정후,장구건호적유이재체pGBKT7-PML-V전화도효모세포AH109중,병이용단백인적법(Western Blotting)분석유이단백적표체정황.동시검측유이단백유무독성、삼루화자격활작용.결과:성공확증료PML-V기인편단,병극륭인pGBKT7중,측서결과정학.유이재체성공전화도효모세포AH109중,유이단백무독성、삼루화자격활작용,Western Blotting분석증실효모세포표체유이단백.결론:성공구건료PML-V결합역적효모유이표체재체,위진일보운용효모쌍잡교기술사선여지상호작용적단백전정료기출.
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