中国兽医科学
中國獸醫科學
중국수의과학
VETERINARY SCIENCE IN CHINA
2008年
3期
229-232
,共4页
张欣%崔敏%罗满林%贺东生%黄毓茂%房红莹%陈钜豪%马魁
張訢%崔敏%囉滿林%賀東生%黃毓茂%房紅瑩%陳鉅豪%馬魁
장흔%최민%라만림%하동생%황육무%방홍형%진거호%마괴
鸭%白细胞介素-2基因%毕赤酵母%表达
鴨%白細胞介素-2基因%畢赤酵母%錶達
압%백세포개소-2기인%필적효모%표체
根据GenBank中登录的鸭IL-2基因序列设计并合成了1对特异性引物,以经ConA诱导的广州鸭外周血淋巴细胞提取的总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增出长度为360 bp的目的基因片段,并将该基因克隆到pMD18-T载体上.酶切鉴定、PCR鉴定及序列测定结果表明,获得了鸭IL-2成熟蛋白基因的完整克隆.测序结果表明,该成熟蛋白基因由360个核苷酸组成,共编码119个氨基酸.克隆的鸭IL-2基因与GenBank上序列号为AYl73028及AF294322的鸭IL-2基因的同源性高达99.4%.将目的基因克隆至真核表达载体pPICZáC上,构建了重组质粒pPICZáC-DuIL-2.酵母转化子经甲醇诱导发酵分泌表达了鸭IL-2基因.SDs-PAGE分析证实,鸭IL-2基因在毕赤酵母(Pichia pastoris)中表达成功,表达的重组蛋白的分子质量约为14.3 ku.
根據GenBank中登錄的鴨IL-2基因序列設計併閤成瞭1對特異性引物,以經ConA誘導的廣州鴨外週血淋巴細胞提取的總RNA為模闆,用RT-PCR方法擴增齣長度為360 bp的目的基因片段,併將該基因剋隆到pMD18-T載體上.酶切鑒定、PCR鑒定及序列測定結果錶明,穫得瞭鴨IL-2成熟蛋白基因的完整剋隆.測序結果錶明,該成熟蛋白基因由360箇覈苷痠組成,共編碼119箇氨基痠.剋隆的鴨IL-2基因與GenBank上序列號為AYl73028及AF294322的鴨IL-2基因的同源性高達99.4%.將目的基因剋隆至真覈錶達載體pPICZáC上,構建瞭重組質粒pPICZáC-DuIL-2.酵母轉化子經甲醇誘導髮酵分泌錶達瞭鴨IL-2基因.SDs-PAGE分析證實,鴨IL-2基因在畢赤酵母(Pichia pastoris)中錶達成功,錶達的重組蛋白的分子質量約為14.3 ku.
근거GenBank중등록적압IL-2기인서렬설계병합성료1대특이성인물,이경ConA유도적엄주압외주혈림파세포제취적총RNA위모판,용RT-PCR방법확증출장도위360 bp적목적기인편단,병장해기인극륭도pMD18-T재체상.매절감정、PCR감정급서렬측정결과표명,획득료압IL-2성숙단백기인적완정극륭.측서결과표명,해성숙단백기인유360개핵감산조성,공편마119개안기산.극륭적압IL-2기인여GenBank상서렬호위AYl73028급AF294322적압IL-2기인적동원성고체99.4%.장목적기인극륭지진핵표체재체pPICZáC상,구건료중조질립pPICZáC-DuIL-2.효모전화자경갑순유도발효분비표체료압IL-2기인.SDs-PAGE분석증실,압IL-2기인재필적효모(Pichia pastoris)중표체성공,표체적중조단백적분자질량약위14.3 ku.
