高校化学工程学报
高校化學工程學報
고교화학공정학보
JOURNAL OF CHEMICAL ENGINEERING OF CHINESE UNIVERSITIES
2011年
1期
96-102
,共7页
刘建荣%王慧%赵晓瑜%静天玉
劉建榮%王慧%趙曉瑜%靜天玉
류건영%왕혜%조효유%정천옥
重组人超氧化物歧化酶%化学渗透%细胞破碎%包含体%复性
重組人超氧化物歧化酶%化學滲透%細胞破碎%包含體%複性
중조인초양화물기화매%화학삼투%세포파쇄%포함체%복성
以化学渗透法破碎重组大肠杆菌细胞释放重组人超氧化物歧化酶(rhSOD)包含体并对其复性.选择四种化学试剂(Triton X-100、EDTA、NaOH和SDS)对rhSOD重组大肠杆菌细胞进行破碎实验,以SDS-PAGE检测破菌效果,结果0.5%Triton X-100和10 mmol·L-1 EDTA可以较好地破碎重组大肠杆菌细胞,所提取的包含体溶解液纯度与超声法相近,可达65%左右.采用透析法复性包含体,尿素终浓度0.1 mol·L-1时rhSOD包含体复性效果优于1.0 mol·L-1,比活分别为:Triton法2800 U·mg-1,EDTA法3200 U·mg-1,超声法2800 U·mg-1,复性rhSOD纯度达85%左右.本研究建立的用于破碎重组大肠杆菌释放rhSOD包含体的Triton法和EDTA法,包含体复性后比活等于或高于超声法,与机械破菌法相比,简便有效,成本低廉,无需特殊破菌设备,为放大规模破菌提取重组大肠杆菌包含体和复性奠定了实验基础.
以化學滲透法破碎重組大腸桿菌細胞釋放重組人超氧化物歧化酶(rhSOD)包含體併對其複性.選擇四種化學試劑(Triton X-100、EDTA、NaOH和SDS)對rhSOD重組大腸桿菌細胞進行破碎實驗,以SDS-PAGE檢測破菌效果,結果0.5%Triton X-100和10 mmol·L-1 EDTA可以較好地破碎重組大腸桿菌細胞,所提取的包含體溶解液純度與超聲法相近,可達65%左右.採用透析法複性包含體,尿素終濃度0.1 mol·L-1時rhSOD包含體複性效果優于1.0 mol·L-1,比活分彆為:Triton法2800 U·mg-1,EDTA法3200 U·mg-1,超聲法2800 U·mg-1,複性rhSOD純度達85%左右.本研究建立的用于破碎重組大腸桿菌釋放rhSOD包含體的Triton法和EDTA法,包含體複性後比活等于或高于超聲法,與機械破菌法相比,簡便有效,成本低廉,無需特殊破菌設備,為放大規模破菌提取重組大腸桿菌包含體和複性奠定瞭實驗基礎.
이화학삼투법파쇄중조대장간균세포석방중조인초양화물기화매(rhSOD)포함체병대기복성.선택사충화학시제(Triton X-100、EDTA、NaOH화SDS)대rhSOD중조대장간균세포진행파쇄실험,이SDS-PAGE검측파균효과,결과0.5%Triton X-100화10 mmol·L-1 EDTA가이교호지파쇄중조대장간균세포,소제취적포함체용해액순도여초성법상근,가체65%좌우.채용투석법복성포함체,뇨소종농도0.1 mol·L-1시rhSOD포함체복성효과우우1.0 mol·L-1,비활분별위:Triton법2800 U·mg-1,EDTA법3200 U·mg-1,초성법2800 U·mg-1,복성rhSOD순도체85%좌우.본연구건립적용우파쇄중조대장간균석방rhSOD포함체적Triton법화EDTA법,포함체복성후비활등우혹고우초성법,여궤계파균법상비,간편유효,성본저렴,무수특수파균설비,위방대규모파균제취중조대장간균포함체화복성전정료실험기출.
