CAJ | 학술논문

目的:探讨不同浓度左旋谷氨酰胺(L-谷氨酰胺)对大鼠脂肪间充质干细胞(AD-MSC)体外培养的影响.方法:取SD大鼠腹股沟处皮下脂肪分离获取AD-MSC,接种至含10%胎牛血清的完全培养液的细胞培养瓶中.24 h首次换液后分为2 mmol/L L-谷氨酰胺组(2 mM组)和0.5 mmol/L L-谷氨酰胺组(0.5 mM组),分别进行体外培养并及时传代.两组各取第1、3代AD-MSC,每代各接种7块96孔板,每24 h各取一块96孔板用噻唑蓝(MTT)测定其生长曲线.两组各取第3代细胞进行成脂和成骨诱导分化,成脂鉴定使用油红O染色,成骨鉴定使用碱性磷酸酶及冯库萨染色.另各取第3代细胞在流式细胞分析仪上行CD29、CD31、CD44、CD45表面分子检测.最后进行细胞冻存及复苏实验.结果:从大鼠脂肪组织分离出的AD-MSCs在两种L-谷氨酰胺下均能稳定生长、增殖,2 mM组生长曲线较0.5 mM组上移,细胞生长加速.两组第三代细胞均能向成骨和成脂方向分化,细胞表面抗原标志相同,即CD29 及CD44高表达,CD31、CD45几乎不表达.两组培养的AD-MSC在液氮中冻存2个月后,细胞生长、增殖活性及多向分化能力无明显降低.结论:两种L-谷氨酰胺浓度体外培养的大鼠AD-MSC均可稳定生长、增殖,2 mmol/L L-谷氨酰胺的细胞增殖速度比0.5 mmol/L可能更快,但两种L-谷氨酰胺浓度对AD-MSCs多向分化潜能、表面抗原表达及冻存后复苏的细胞活力等生物特性无明显影响.
목적:탐토불동농도좌선곡안선알(L-곡안선알)대대서지방간충질간세포(AD-MSC)체외배양적영향.방법:취SD대서복고구처피하지방분리획취AD-MSC,접충지함10%태우혈청적완전배양액적세포배양병중.24 h수차환액후분위2 mmol/L L-곡안선알조(2 mM조)화0.5 mmol/L L-곡안선알조(0.5 mM조),분별진행체외배양병급시전대.량조각취제1、3대AD-MSC,매대각접충7괴96공판,매24 h각취일괴96공판용새서람(MTT)측정기생장곡선.량조각취제3대세포진행성지화성골유도분화,성지감정사용유홍O염색,성골감정사용감성린산매급풍고살염색.령각취제3대세포재류식세포분석의상행CD29、CD31、CD44、CD45표면분자검측.최후진행세포동존급복소실험.결과:종대서지방조직분리출적AD-MSCs재량충L-곡안선알하균능은정생장、증식,2 mM조생장곡선교0.5 mM조상이,세포생장가속.량조제삼대세포균능향성골화성지방향분화,세포표면항원표지상동,즉CD29 급CD44고표체,CD31、CD45궤호불표체.량조배양적AD-MSC재액담중동존2개월후,세포생장、증식활성급다향분화능력무명현강저.결론:량충L-곡안선알농도체외배양적대서AD-MSC균가은정생장、증식,2 mmol/L L-곡안선알적세포증식속도비0.5 mmol/L가능경쾌,단량충L-곡안선알농도대AD-MSCs다향분화잠능、표면항원표체급동존후복소적세포활력등생물특성무명현영향.