中国病毒学
中國病毒學
중국병독학
VIROLOGICA SINICA
2005年
4期
383-387
,共5页
侯秋莲%王静%刘胜旺%孔宪刚%韩宗玺%冉多良
侯鞦蓮%王靜%劉勝旺%孔憲剛%韓宗璽%冉多良
후추련%왕정%류성왕%공헌강%한종새%염다량
鹅细小病毒%vp2基因%克隆%表达%多克隆抗体
鵝細小病毒%vp2基因%剋隆%錶達%多剋隆抗體
아세소병독%vp2기인%극륭%표체%다극륭항체
根据鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)中国分离株HG5/82基因序列,设计引物,利用PCR技术扩增出HG5/82株vp2基因,将其克隆到pMD18-T载体后,转化入感受态细胞TG1中增殖.筛选阳性质粒,将其与原核表达载体pPROEXTMHTb分别用Nco Ⅰ酶切后回收目的片断,进行定向连接,产物转化入感受态DH5α,重组质粒经酶切和测序证实目的基因正确克隆到表达载体的预期位点且插入方向正确,构建了含有HG5/82主要结构基因vp2 5'端969bp片段的原核表达载体.经IPTG诱导后表达出与预期大小相符的约36kDa的融合蛋白,表达形式为包涵体.薄层扫描结果表明表达产物约占菌体总蛋白的21.4%.包涵体通过6mol/L盐酸胍裂解后,利用镍离子亲和树脂进行纯化,用纯化的分子量为36kDa的融合蛋白免疫新西兰白兔,制备兔抗鹅细小病毒部分结构蛋白多克隆抗体.Western blot分析表明该多克隆抗体与HG5/82毒株具有反应性,说明该融合蛋白具有抗原性.
根據鵝細小病毒(Goose parvovirus,GPV)中國分離株HG5/82基因序列,設計引物,利用PCR技術擴增齣HG5/82株vp2基因,將其剋隆到pMD18-T載體後,轉化入感受態細胞TG1中增殖.篩選暘性質粒,將其與原覈錶達載體pPROEXTMHTb分彆用Nco Ⅰ酶切後迴收目的片斷,進行定嚮連接,產物轉化入感受態DH5α,重組質粒經酶切和測序證實目的基因正確剋隆到錶達載體的預期位點且插入方嚮正確,構建瞭含有HG5/82主要結構基因vp2 5'耑969bp片段的原覈錶達載體.經IPTG誘導後錶達齣與預期大小相符的約36kDa的融閤蛋白,錶達形式為包涵體.薄層掃描結果錶明錶達產物約佔菌體總蛋白的21.4%.包涵體通過6mol/L鹽痠胍裂解後,利用鎳離子親和樹脂進行純化,用純化的分子量為36kDa的融閤蛋白免疫新西蘭白兔,製備兔抗鵝細小病毒部分結構蛋白多剋隆抗體.Western blot分析錶明該多剋隆抗體與HG5/82毒株具有反應性,說明該融閤蛋白具有抗原性.
근거아세소병독(Goose parvovirus,GPV)중국분리주HG5/82기인서렬,설계인물,이용PCR기술확증출HG5/82주vp2기인,장기극륭도pMD18-T재체후,전화입감수태세포TG1중증식.사선양성질립,장기여원핵표체재체pPROEXTMHTb분별용Nco Ⅰ매절후회수목적편단,진행정향련접,산물전화입감수태DH5α,중조질립경매절화측서증실목적기인정학극륭도표체재체적예기위점차삽입방향정학,구건료함유HG5/82주요결구기인vp2 5'단969bp편단적원핵표체재체.경IPTG유도후표체출여예기대소상부적약36kDa적융합단백,표체형식위포함체.박층소묘결과표명표체산물약점균체총단백적21.4%.포함체통과6mol/L염산고렬해후,이용얼리자친화수지진행순화,용순화적분자량위36kDa적융합단백면역신서란백토,제비토항아세소병독부분결구단백다극륭항체.Western blot분석표명해다극륭항체여HG5/82독주구유반응성,설명해융합단백구유항원성.
