CAJ | 학술논문

背景:目前关于骨髓基质干细胞的标记报道较多,各有其优缺点,寻找一种有效、简便的细胞标记与示踪的方法尤为关键.目的:观察经荧光活性染料Dil标记的大鼠骨髓基质干细胞生长增殖与成骨分化情况.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-09/12在南方医科大学组织工程研究中心完成.材料:SD大鼠10只,由南方医科大学实验动物中心提供.Dil应用液为美国Molecular Probe Inc公司产品.方法:全骨髓法体外分离培养大鼠骨髓基质干细胞,取传至第3代细胞,加入无血清的DMEM制成细胞悬液,再加入1×109L-1的Dil应用液5 μL,37℃下孵育25 min,清洗离心后,加入DMEM高糖完全培养基,荧光显微镜观察细胞荧光强度及形态变化.另取传至第3代细胞,加入含地塞米松、维生素C、β-磷酸甘钠、体积分数为10%胎牛血清的成骨诱导剂进行诱导分化.主要观察指标:Dil标记后细胞形态变化,XTT比色法测定细胞增殖状况,细胞上清液中乳酸脱氢酶活性,成骨诱导后细胞碱性磷酸酶活性及成骨分化能力.结果:锥虫蓝染色见骨髓基质干细胞活力好,仅偶见蓝染细胞,荧光显微镜下Dil标记后全部细胞的胞浆、胞膜均显红色荧光,标记的骨髓基质干细胞呈梭形,胞浆丰富,保持了良好的正常形态,Dil标记阳性率为100%,标记早期细胞形态呈荧光环状,48 h后细胞中荧光颗粒增多,荧光增强,细胞核未染荧光.与未标记细胞比较,Dil标记的骨髓基质干细胞增殖吸光度、培养上清液乳酸脱氢酶活性、碱性磷酸酶活性均无明显变化(P>0.05).成骨诱导7 d后,钙钴法染色两组骨髓基质干细胞均见不同程度的胞质呈棕黑色改变.结论:Dil能有效标记体外培养的骨髓基质干细胞,并在细胞内稳定表达,且标记细胞形态良好,对活体细胞无毒性作用;此外,Dil标记不影响骨髓基质干细胞的生长、增殖及成骨分化能力. 揹景:目前關于骨髓基質榦細胞的標記報道較多,各有其優缺點,尋找一種有效、簡便的細胞標記與示蹤的方法尤為關鍵.目的:觀察經熒光活性染料Dil標記的大鼠骨髓基質榦細胞生長增殖與成骨分化情況.設計、時間及地點:細胞學體外觀察,于2008-09/12在南方醫科大學組織工程研究中心完成.材料:SD大鼠10隻,由南方醫科大學實驗動物中心提供.Dil應用液為美國Molecular Probe Inc公司產品.方法:全骨髓法體外分離培養大鼠骨髓基質榦細胞,取傳至第3代細胞,加入無血清的DMEM製成細胞懸液,再加入1×109L-1的Dil應用液5 μL,37℃下孵育25 min,清洗離心後,加入DMEM高糖完全培養基,熒光顯微鏡觀察細胞熒光彊度及形態變化.另取傳至第3代細胞,加入含地塞米鬆、維生素C、β-燐痠甘鈉、體積分數為10%胎牛血清的成骨誘導劑進行誘導分化.主要觀察指標:Dil標記後細胞形態變化,XTT比色法測定細胞增殖狀況,細胞上清液中乳痠脫氫酶活性,成骨誘導後細胞堿性燐痠酶活性及成骨分化能力.結果:錐蟲藍染色見骨髓基質榦細胞活力好,僅偶見藍染細胞,熒光顯微鏡下Dil標記後全部細胞的胞漿、胞膜均顯紅色熒光,標記的骨髓基質榦細胞呈梭形,胞漿豐富,保持瞭良好的正常形態,Dil標記暘性率為100%,標記早期細胞形態呈熒光環狀,48 h後細胞中熒光顆粒增多,熒光增彊,細胞覈未染熒光.與未標記細胞比較,Dil標記的骨髓基質榦細胞增殖吸光度、培養上清液乳痠脫氫酶活性、堿性燐痠酶活性均無明顯變化(P>0.05).成骨誘導7 d後,鈣鈷法染色兩組骨髓基質榦細胞均見不同程度的胞質呈棕黑色改變.結論:Dil能有效標記體外培養的骨髓基質榦細胞,併在細胞內穩定錶達,且標記細胞形態良好,對活體細胞無毒性作用;此外,Dil標記不影響骨髓基質榦細胞的生長、增殖及成骨分化能力.
배경:목전관우골수기질간세포적표기보도교다,각유기우결점,심조일충유효、간편적세포표기여시종적방법우위관건.목적:관찰경형광활성염료Dil표기적대서골수기질간세포생장증식여성골분화정황.설계、시간급지점:세포학체외관찰,우2008-09/12재남방의과대학조직공정연구중심완성.재료:SD대서10지,유남방의과대학실험동물중심제공.Dil응용액위미국Molecular Probe Inc공사산품.방법:전골수법체외분리배양대서골수기질간세포,취전지제3대세포,가입무혈청적DMEM제성세포현액,재가입1×109L-1적Dil응용액5 μL,37℃하부육25 min,청세리심후,가입DMEM고당완전배양기,형광현미경관찰세포형광강도급형태변화.령취전지제3대세포,가입함지새미송、유생소C、β-린산감납、체적분수위10%태우혈청적성골유도제진행유도분화.주요관찰지표:Dil표기후세포형태변화,XTT비색법측정세포증식상황,세포상청액중유산탈경매활성,성골유도후세포감성린산매활성급성골분화능력.결과:추충람염색견골수기질간세포활력호,부우견람염세포,형광현미경하Dil표기후전부세포적포장、포막균현홍색형광,표기적골수기질간세포정사형,포장봉부,보지료량호적정상형태,Dil표기양성솔위100%,표기조기세포형태정형광배상,48 h후세포중형광과립증다,형광증강,세포핵미염형광.여미표기세포비교,Dil표기적골수기질간세포증식흡광도、배양상청액유산탈경매활성、감성린산매활성균무명현변화(P>0.05).성골유도7 d후,개고법염색량조골수기질간세포균견불동정도적포질정종흑색개변.결론:Dil능유효표기체외배양적골수기질간세포,병재세포내은정표체,차표기세포형태량호,대활체세포무독성작용;차외,Dil표기불영향골수기질간세포적생장、증식급성골분화능력.