东北林业大学学报
東北林業大學學報
동북임업대학학보
JOURNAL OF NORTHEAST FORESTRY UNIVERSITY
2011年
11期
71-75
,共5页
胡薇%孟星宇%田玉华%刘宁
鬍薇%孟星宇%田玉華%劉寧
호미%맹성우%전옥화%류저
梅花鹿%鹿茸%胰岛素样生长因子1%cDNA克隆%荧光定量%表达
梅花鹿%鹿茸%胰島素樣生長因子1%cDNA剋隆%熒光定量%錶達
매화록%록용%이도소양생장인자1%cDNA극륭%형광정량%표체
为了检测梅花鹿鹿茸组织IGF1基因的mRNA表达水平,利用TRIzol试剂法分别提取鹿茸真皮、间充质、前软骨和软骨组织总RNA,逆转录合成cDNA.根据GenBank已发表的相关序列设计梅花鹿IGFI基因特异引物并克隆IGFI基因,将IGF1基因DNA序列递交GenBank,并利用相对荧光定量Real-time PCR法检测IGF1在鹿茸顶端不同部位组织的转录表达丰度.研究结果表明:成功获得了梅花鹿鹿茸组织IGF1基因全长编码区cDNA(GenBank登录号为HQ890468),该基因长465 bp,编码154aa长度的多肽;与马鹿、牛、羊、马、猪、人和小鼠IGF1基因进行同源性分析显示,IGF1基因与马鹿、牛和羊同源性最高,核苷酸序列分别为99.78％ 、98.28％和97.85％；氨基酸序列分别为99.35％、98.05％和97.40％.相对荧光定量PCR差异分析发现,IGF1基因在鹿茸顶端不同部位组织均有表达.其中,在前软骨和软骨组织的表达水平明显高于真皮和间充质组织.
為瞭檢測梅花鹿鹿茸組織IGF1基因的mRNA錶達水平,利用TRIzol試劑法分彆提取鹿茸真皮、間充質、前軟骨和軟骨組織總RNA,逆轉錄閤成cDNA.根據GenBank已髮錶的相關序列設計梅花鹿IGFI基因特異引物併剋隆IGFI基因,將IGF1基因DNA序列遞交GenBank,併利用相對熒光定量Real-time PCR法檢測IGF1在鹿茸頂耑不同部位組織的轉錄錶達豐度.研究結果錶明:成功穫得瞭梅花鹿鹿茸組織IGF1基因全長編碼區cDNA(GenBank登錄號為HQ890468),該基因長465 bp,編碼154aa長度的多肽;與馬鹿、牛、羊、馬、豬、人和小鼠IGF1基因進行同源性分析顯示,IGF1基因與馬鹿、牛和羊同源性最高,覈苷痠序列分彆為99.78％ 、98.28％和97.85％；氨基痠序列分彆為99.35％、98.05％和97.40％.相對熒光定量PCR差異分析髮現,IGF1基因在鹿茸頂耑不同部位組織均有錶達.其中,在前軟骨和軟骨組織的錶達水平明顯高于真皮和間充質組織.
위료검측매화록록용조직IGF1기인적mRNA표체수평,이용TRIzol시제법분별제취록용진피、간충질、전연골화연골조직총RNA,역전록합성cDNA.근거GenBank이발표적상관서렬설계매화록IGFI기인특이인물병극륭IGFI기인,장IGF1기인DNA서렬체교GenBank,병이용상대형광정량Real-time PCR법검측IGF1재록용정단불동부위조직적전록표체봉도.연구결과표명:성공획득료매화록록용조직IGF1기인전장편마구cDNA(GenBank등록호위HQ890468),해기인장465 bp,편마154aa장도적다태;여마록、우、양、마、저、인화소서IGF1기인진행동원성분석현시,IGF1기인여마록、우화양동원성최고,핵감산서렬분별위99.78％ 、98.28％화97.85％；안기산서렬분별위99.35％、98.05％화97.40％.상대형광정량PCR차이분석발현,IGF1기인재록용정단불동부위조직균유표체.기중,재전연골화연골조직적표체수평명현고우진피화간충질조직.
