生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2012年
1期
13-18
,共6页
王计伟%施庆珊%欧阳友生%胡文锋%陈仪本
王計偉%施慶珊%歐暘友生%鬍文鋒%陳儀本
왕계위%시경산%구양우생%호문봉%진의본
地衣芽孢杆菌ATCC9945A%γ - PGA降解酶基因%克隆表达%降解性能
地衣芽孢桿菌ATCC9945A%γ - PGA降解酶基因%剋隆錶達%降解性能
지의아포간균ATCC9945A%γ - PGA강해매기인%극륭표체%강해성능
目的:验证在地衣芽胞杆菌ATCC9945A中存在着γ-聚谷氨酸降解酶基因(ywtD),为下一步解决在γ-聚谷氨酸微生物发酵合成过程中产物γ - PGA降解的技术性难题提供依据.方法:通过在pET -28b(+)大肠杆菌表达系统克隆表达地衣芽孢杆菌ATCC9945A中的ywtD基因,对诱导表达条件进行优化,采用SDS- PAGE和Western Blot方法检测目的蛋白的表达,并体外酶解实验验证其活性.结果:PCR扩增得到了一个1 245bp的基因片段,预期编码414个氨基酸,诱导表达后得到一个分子量大小约为45.6 kDa的表达产物.Western Blot分析结果表明ywtD基因得到了有效表达.体外酶解实验表明该表达产物具有降解γ - PGA的活性.结论:证明在地衣芽胞杆菌ATCC9945A中存在着γ-聚谷氨酸降解酶基因.
目的:驗證在地衣芽胞桿菌ATCC9945A中存在著γ-聚穀氨痠降解酶基因(ywtD),為下一步解決在γ-聚穀氨痠微生物髮酵閤成過程中產物γ - PGA降解的技術性難題提供依據.方法:通過在pET -28b(+)大腸桿菌錶達繫統剋隆錶達地衣芽孢桿菌ATCC9945A中的ywtD基因,對誘導錶達條件進行優化,採用SDS- PAGE和Western Blot方法檢測目的蛋白的錶達,併體外酶解實驗驗證其活性.結果:PCR擴增得到瞭一箇1 245bp的基因片段,預期編碼414箇氨基痠,誘導錶達後得到一箇分子量大小約為45.6 kDa的錶達產物.Western Blot分析結果錶明ywtD基因得到瞭有效錶達.體外酶解實驗錶明該錶達產物具有降解γ - PGA的活性.結論:證明在地衣芽胞桿菌ATCC9945A中存在著γ-聚穀氨痠降解酶基因.
목적:험증재지의아포간균ATCC9945A중존재착γ-취곡안산강해매기인(ywtD),위하일보해결재γ-취곡안산미생물발효합성과정중산물γ - PGA강해적기술성난제제공의거.방법:통과재pET -28b(+)대장간균표체계통극륭표체지의아포간균ATCC9945A중적ywtD기인,대유도표체조건진행우화,채용SDS- PAGE화Western Blot방법검측목적단백적표체,병체외매해실험험증기활성.결과:PCR확증득도료일개1 245bp적기인편단,예기편마414개안기산,유도표체후득도일개분자량대소약위45.6 kDa적표체산물.Western Blot분석결과표명ywtD기인득도료유효표체.체외매해실험표명해표체산물구유강해γ - PGA적활성.결론:증명재지의아포간균ATCC9945A중존재착γ-취곡안산강해매기인.
