CAJ | 학술논문

目的探讨蛋白激酶Cα(PKCα)对小鼠胚胎干细胞(ESCs)定向诱导分化中发育基因(pax-6、slit-2、netrin-1)表达的影响.方法 ES-BALB/c细胞株用无白血病抑制因子(mLIF)的ESCs培养液培养4 d,形成胚胎体(EBs),再分别种植于预置有盖玻片的6孔板和直径100 mm的培养皿,经5×10-7 mol/L视黄酸 (RA)诱导后,用神经细胞特异性抗原NSE和NF-200来鉴定分化细胞的类型,在诱导后1、3、5、7及14 d用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定细胞的PKCα和发育基因的mRNA表达情况 ,并观察了PKC激活剂佛波酯(PMA)和PKC抑制剂D-鞘氨醇对它们表达的影响.结果免疫组化发现在诱导后第3 d大多数细胞NSE和NF-200染色阳性,RT-PCR 证实诱导后1 d PKCα、pax-6和netrin-1的mRNA表达急剧下降,3～7 d逐渐升高,至14 d恢复至正常水平,而slit-2在诱导前后均无明显表达.PMA可使PKCα、 pax-6、netrin-1 的mRNA水平在诱导后细胞中的表达明显增强,而D-鞘氨醇的作用相反, 使它们的表达显著降低,而对slit-2无明显影响.结论发育基因pax-6和netrin-1在ESCs定向分化为神经样细胞中有重要的调控作用,可能是通过PKCα信号通路起作用.(中华眼科杂志,2005,41:123-127)
목적탐토단백격매Cα(PKCα)대소서배태간세포(ESCs)정향유도분화중발육기인(pax-6、slit-2、netrin-1)표체적영향.방법 ES-BALB/c세포주용무백혈병억제인자(mLIF)적ESCs배양액배양4 d,형성배태체(EBs),재분별충식우예치유개파편적6공판화직경100 mm적배양명,경5×10-7 mol/L시황산 (RA)유도후,용신경세포특이성항원NSE화NF-200래감정분화세포적류형,재유도후1、3、5、7급14 d용역전록취합매련반응(RT-PCR)방법측정세포적PKCα화발육기인적mRNA표체정황 ,병관찰료PKC격활제불파지(PMA)화PKC억제제D-초안순대타문표체적영향.결과면역조화발현재유도후제3 d대다수세포NSE화NF-200염색양성,RT-PCR 증실유도후1 d PKCα、pax-6화netrin-1적mRNA표체급극하강,3～7 d축점승고,지14 d회복지정상수평,이slit-2재유도전후균무명현표체.PMA가사PKCα、 pax-6、netrin-1 적mRNA수평재유도후세포중적표체명현증강,이D-초안순적작용상반, 사타문적표체현저강저,이대slit-2무명현영향.결론발육기인pax-6화netrin-1재ESCs정향분화위신경양세포중유중요적조공작용,가능시통과PKCα신호통로기작용.(중화안과잡지,2005,41:123-127)