畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2003年
5期
509-514
,共6页
张龙现%蒋金书%刘群%宁长申%朱引洁%吴绍强
張龍現%蔣金書%劉群%寧長申%硃引潔%吳紹彊
장룡현%장금서%류군%저장신%주인길%오소강
隐孢子虫卵囊%巢式PCR
隱孢子蟲卵囊%巢式PCR
은포자충란낭%소식PCR
隐孢子虫病是一种重要的人畜共患原虫病.为了在临床样品中更准确、快速地检测隐孢子虫卵囊,从初步纯化的含有不同数量隐孢子虫卵囊的样品中和含有不同数量隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中,直接提取DNA或用DNA纯化试剂盒对提取的奶牛粪便中卵囊DNA进行纯化之后用作起始PCR(Primary-PCR)模板,以起始PCR的产物为模板进行巢式PCR(Nested-PCR),用2对人工合成寡核苷酸分别作为两个PCR的引物,扩增片段大小分别为1325 bp和820 bp.优化了Mg2+浓度、引物浓度和dNTP浓度,并进行了特异性检验.建立的巢式PCR具有隐孢子虫属特异性,不仅扩增出新鲜样品DNA提取物中的目的片段,而且扩增出放置6年之久的DNA提取物中的目的片段.样品经过初步纯化之后,起始PCR和巢式PCR最低检测值卵囊分别为2.86×103个/ml和≤2.86个/ml;从含有隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中提取DNA,尔后经过DNA纯化试剂盒纯化.其起始PCR和巢式PCR粪便中卵囊最低检测值分别为2.86×107个/g和≤2.86个/g.有望发展为试剂盒.
隱孢子蟲病是一種重要的人畜共患原蟲病.為瞭在臨床樣品中更準確、快速地檢測隱孢子蟲卵囊,從初步純化的含有不同數量隱孢子蟲卵囊的樣品中和含有不同數量隱孢子蟲卵囊的奶牛糞便中,直接提取DNA或用DNA純化試劑盒對提取的奶牛糞便中卵囊DNA進行純化之後用作起始PCR(Primary-PCR)模闆,以起始PCR的產物為模闆進行巢式PCR(Nested-PCR),用2對人工閤成寡覈苷痠分彆作為兩箇PCR的引物,擴增片段大小分彆為1325 bp和820 bp.優化瞭Mg2+濃度、引物濃度和dNTP濃度,併進行瞭特異性檢驗.建立的巢式PCR具有隱孢子蟲屬特異性,不僅擴增齣新鮮樣品DNA提取物中的目的片段,而且擴增齣放置6年之久的DNA提取物中的目的片段.樣品經過初步純化之後,起始PCR和巢式PCR最低檢測值卵囊分彆為2.86×103箇/ml和≤2.86箇/ml;從含有隱孢子蟲卵囊的奶牛糞便中提取DNA,爾後經過DNA純化試劑盒純化.其起始PCR和巢式PCR糞便中卵囊最低檢測值分彆為2.86×107箇/g和≤2.86箇/g.有望髮展為試劑盒.
은포자충병시일충중요적인축공환원충병.위료재림상양품중경준학、쾌속지검측은포자충란낭,종초보순화적함유불동수량은포자충란낭적양품중화함유불동수량은포자충란낭적내우분편중,직접제취DNA혹용DNA순화시제합대제취적내우분편중란낭DNA진행순화지후용작기시PCR(Primary-PCR)모판,이기시PCR적산물위모판진행소식PCR(Nested-PCR),용2대인공합성과핵감산분별작위량개PCR적인물,확증편단대소분별위1325 bp화820 bp.우화료Mg2+농도、인물농도화dNTP농도,병진행료특이성검험.건립적소식PCR구유은포자충속특이성,불부확증출신선양품DNA제취물중적목적편단,이차확증출방치6년지구적DNA제취물중적목적편단.양품경과초보순화지후,기시PCR화소식PCR최저검측치란낭분별위2.86×103개/ml화≤2.86개/ml;종함유은포자충란낭적내우분편중제취DNA,이후경과DNA순화시제합순화.기기시PCR화소식PCR분편중란낭최저검측치분별위2.86×107개/g화≤2.86개/g.유망발전위시제합.
