生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2005年
4期
547-552
,共6页
洪宇植%肖亚中%房伟%张书祥%查向东%李剑凤%周宏敏
洪宇植%肖亞中%房偉%張書祥%查嚮東%李劍鳳%週宏敏
홍우식%초아중%방위%장서상%사향동%리검봉%주굉민
真菌漆酶%定量RT-PCR%长距离反向PCR%顺式作用元件
真菌漆酶%定量RT-PCR%長距離反嚮PCR%順式作用元件
진균칠매%정량RT-PCR%장거리반향PCR%순식작용원건
Trametes sp.AH28-2漆酶同工酶的合成需要铜离子的存在,较高浓度的Cu2+有利于漆酶合成.在以葡萄糖为碳源补加0.5mmol/L Cu2+的培养基中生长时,发酵液漆酶活性为44.3u/L,同时补加4.0mmol/L邻甲苯胺时,漆酶酶活提高到71.0u/L;而在补加Cu2+和邻甲苯胺的纤维二糖培养基中,酶活上升至2584u/L,为葡萄糖培养基的36.4倍.邻甲苯胺和铜离子诱导产生的漆酶同工酶组分,均为漆酶A(LacA).竞争性RT-PCR分析表明,漆酶A基因(lacA)转录本的累积伴随有发酵液漆酶活性的增加,邻甲苯胺对lacA的调控发生在转录水平.lacA结构基因长2110bp,含有10个内含子;lacA的cDNA序列为1560bp,编码520aa的漆酶蛋白,其氨基酸序列与其它真菌漆酶具有较高的相似性.采用改进的反向PCR技术,扩增得到的lacA 5'-端调控区长1881bp,分析表明,该区域上分布有1个TATA框、7个CAAT框和多个潜在的顺式作用元件序列位点,包括5个MRE元件、9个CreA结合位点、4个XRE元件、2个STRE元件和7个氮因子调控位点等.这些序列位点的存在部分地对应了菌株摇瓶发酵条件下lacA的表达规律.
Trametes sp.AH28-2漆酶同工酶的閤成需要銅離子的存在,較高濃度的Cu2+有利于漆酶閤成.在以葡萄糖為碳源補加0.5mmol/L Cu2+的培養基中生長時,髮酵液漆酶活性為44.3u/L,同時補加4.0mmol/L鄰甲苯胺時,漆酶酶活提高到71.0u/L;而在補加Cu2+和鄰甲苯胺的纖維二糖培養基中,酶活上升至2584u/L,為葡萄糖培養基的36.4倍.鄰甲苯胺和銅離子誘導產生的漆酶同工酶組分,均為漆酶A(LacA).競爭性RT-PCR分析錶明,漆酶A基因(lacA)轉錄本的纍積伴隨有髮酵液漆酶活性的增加,鄰甲苯胺對lacA的調控髮生在轉錄水平.lacA結構基因長2110bp,含有10箇內含子;lacA的cDNA序列為1560bp,編碼520aa的漆酶蛋白,其氨基痠序列與其它真菌漆酶具有較高的相似性.採用改進的反嚮PCR技術,擴增得到的lacA 5'-耑調控區長1881bp,分析錶明,該區域上分佈有1箇TATA框、7箇CAAT框和多箇潛在的順式作用元件序列位點,包括5箇MRE元件、9箇CreA結閤位點、4箇XRE元件、2箇STRE元件和7箇氮因子調控位點等.這些序列位點的存在部分地對應瞭菌株搖瓶髮酵條件下lacA的錶達規律.
Trametes sp.AH28-2칠매동공매적합성수요동리자적존재,교고농도적Cu2+유리우칠매합성.재이포도당위탄원보가0.5mmol/L Cu2+적배양기중생장시,발효액칠매활성위44.3u/L,동시보가4.0mmol/L린갑분알시,칠매매활제고도71.0u/L;이재보가Cu2+화린갑분알적섬유이당배양기중,매활상승지2584u/L,위포도당배양기적36.4배.린갑분알화동리자유도산생적칠매동공매조분,균위칠매A(LacA).경쟁성RT-PCR분석표명,칠매A기인(lacA)전록본적루적반수유발효액칠매활성적증가,린갑분알대lacA적조공발생재전록수평.lacA결구기인장2110bp,함유10개내함자;lacA적cDNA서렬위1560bp,편마520aa적칠매단백,기안기산서렬여기타진균칠매구유교고적상사성.채용개진적반향PCR기술,확증득도적lacA 5'-단조공구장1881bp,분석표명,해구역상분포유1개TATA광、7개CAAT광화다개잠재적순식작용원건서렬위점,포괄5개MRE원건、9개CreA결합위점、4개XRE원건、2개STRE원건화7개담인자조공위점등.저사서렬위점적존재부분지대응료균주요병발효조건하lacA적표체규률.
