医学分子生物学杂志
醫學分子生物學雜誌
의학분자생물학잡지
FOREIGN MEDICAL SCIENCES
2006年
6期
407-413
,共7页
颜景斌%朱怡文%肖艳萍%王舒%任兆瑞%黄淑帧%曾溢滔
顏景斌%硃怡文%肖豔萍%王舒%任兆瑞%黃淑幀%曾溢滔
안경빈%주이문%초염평%왕서%임조서%황숙정%증일도
转基因小鼠%外源基因%整合%拷贝数%嵌合体
轉基因小鼠%外源基因%整閤%拷貝數%嵌閤體
전기인소서%외원기인%정합%고패수%감합체
目的 研究外源基因在转基因小鼠及其家系中的整合状况.方法 采用PCR、定量PCR和荧光原位杂交(FISH)的方法对原代转基因小鼠中外源人凝血因子Ⅸ(HfⅨ)基因的整合和嵌合情况进行分析.使用PCR、直接测序法鉴定整合的外源基因多拷贝的连接方向和连接方式.结果 7个家系中F0-8、F0-10和F0-11的后代中阳性个体比例明显低于50%,3个原代小鼠DNA中HfⅨ基因拷贝数分别只有子代中的66.2%、18.8%和28.3%.F0-11小鼠各脏器中嵌合比差异极大,且未见胚系特异性分布.不同个体间整合拷贝数差异极大,最少的F0-69为单拷贝,最多的F0-10有43个拷贝.而整合位点分析发现外源基因在随机分布中仍呈现一定的趋向性.PCR和测序结果证明所有小鼠中外源基因多拷贝均为头尾连接,连接的机制以粘性末端介导的连接为主,F0-13中还存在同源序列配对、断裂、修复介导的头尾连接.结论 在整合有HfⅨ基因的转基因小鼠中多拷贝外源基因多以粘性末端介导的头尾连接方式整合在染色体的某些特定区域.
目的 研究外源基因在轉基因小鼠及其傢繫中的整閤狀況.方法 採用PCR、定量PCR和熒光原位雜交(FISH)的方法對原代轉基因小鼠中外源人凝血因子Ⅸ(HfⅨ)基因的整閤和嵌閤情況進行分析.使用PCR、直接測序法鑒定整閤的外源基因多拷貝的連接方嚮和連接方式.結果 7箇傢繫中F0-8、F0-10和F0-11的後代中暘性箇體比例明顯低于50%,3箇原代小鼠DNA中HfⅨ基因拷貝數分彆隻有子代中的66.2%、18.8%和28.3%.F0-11小鼠各髒器中嵌閤比差異極大,且未見胚繫特異性分佈.不同箇體間整閤拷貝數差異極大,最少的F0-69為單拷貝,最多的F0-10有43箇拷貝.而整閤位點分析髮現外源基因在隨機分佈中仍呈現一定的趨嚮性.PCR和測序結果證明所有小鼠中外源基因多拷貝均為頭尾連接,連接的機製以粘性末耑介導的連接為主,F0-13中還存在同源序列配對、斷裂、脩複介導的頭尾連接.結論 在整閤有HfⅨ基因的轉基因小鼠中多拷貝外源基因多以粘性末耑介導的頭尾連接方式整閤在染色體的某些特定區域.
목적 연구외원기인재전기인소서급기가계중적정합상황.방법 채용PCR、정량PCR화형광원위잡교(FISH)적방법대원대전기인소서중외원인응혈인자Ⅸ(HfⅨ)기인적정합화감합정황진행분석.사용PCR、직접측서법감정정합적외원기인다고패적련접방향화련접방식.결과 7개가계중F0-8、F0-10화F0-11적후대중양성개체비례명현저우50%,3개원대소서DNA중HfⅨ기인고패수분별지유자대중적66.2%、18.8%화28.3%.F0-11소서각장기중감합비차이겁대,차미견배계특이성분포.불동개체간정합고패수차이겁대,최소적F0-69위단고패,최다적F0-10유43개고패.이정합위점분석발현외원기인재수궤분포중잉정현일정적추향성.PCR화측서결과증명소유소서중외원기인다고패균위두미련접,련접적궤제이점성말단개도적련접위주,F0-13중환존재동원서렬배대、단렬、수복개도적두미련접.결론 재정합유HfⅨ기인적전기인소서중다고패외원기인다이점성말단개도적두미련접방식정합재염색체적모사특정구역.
