CAJ | 학술논문

目的:对同一个体不同部位来源的脂肪干细胞体外成脂诱导分化的能力进行比较,为脂肪干细胞的进一步应用提供实验依据.方法:实验于2004-11/2005-05在中国协和医科大学整形外科医院研究中心完成.提取5例女性临床吸脂患者(平均年龄32岁)8个部位(大腿前侧、臀上部;臀上部、上腹部;髂腰部;上腹部;背部、上臂)脂肪抽吸组织中的间充质干细胞,体外进行成脂诱导分化.在对照培养基(含体积分数0.1胎牛血清的DMEM培养基)中培养的第1代脂肪干细胞,以3x104细胞/皿接种到35 mm培养皿中,将对照培养基更换为成脂诱导培养基,进行成脂诱导,每周换液2次,以加入对照培养基的培养皿设为阴性对照.继续培养2周,分别取诱导后的细胞和阴性对照细胞各两皿进行油红O染色,以证实细胞中有无脂滴形成.通过油红O染色及阳性细胞记数,分别对来源于3例患者的2个不同部位的脂肪抽吸标本中的脂肪干细胞向成脂细胞分化的能力进行定性和半定量检测,采用卡方检验对不同细胞的成脂诱导分化率进行测定.结果:①脂肪干细胞成脂诱导分化能力的测定结果:从不同个体的每100mL脂肪抽吸组织中提取的平均脂肪干细胞数目有所不同,从2.45×108个/100 mL～1.25×109个/100 mL不等;但从同一个体不同部位的脂肪中所获得的干细胞数目却比较近似;根据各例细胞成脂诱导分化率,可得出5例患者8个部位细胞的平均成脂诱导分化率为36.2%.经统计学分析证实同一个体不同部位来源的细胞具有不同的成脂分化能力,获得的平均干细胞数目与年龄无关(r=0.098,P=0.817),而细胞的成脂分化能力与年龄呈明显负相关(r=-0.568,P＜0.01).②成脂诱导后脂肪干细胞形态变化及油红O染色定性结果.脂肪干细胞经诱导后体积增大,分化为成脂细胞,细胞浆中可见许多大小不等的橙红色脂滴,多者可占整个细胞体积的80%～90%,细胞核缩小或偏于细胞的一侧,呈阳性;而在普通培养基中生长的对照细胞未见体积增大和脂滴形成,呈阴性.结论:患者年龄越大,成脂分化率越低,且同一患者不同部位来源的脂肪抽吸组织中的脂肪干细胞在成脂诱导分化能力上存在差异.提示利用脂肪干细胞进行相关实验时,在患者年龄和取材部位上应有所选择,进一步分析有可能找到获取脂肪干细胞的最佳部位. 目的:對同一箇體不同部位來源的脂肪榦細胞體外成脂誘導分化的能力進行比較,為脂肪榦細胞的進一步應用提供實驗依據.方法:實驗于2004-11/2005-05在中國協和醫科大學整形外科醫院研究中心完成.提取5例女性臨床吸脂患者(平均年齡32歲)8箇部位(大腿前側、臀上部;臀上部、上腹部;髂腰部;上腹部;揹部、上臂)脂肪抽吸組織中的間充質榦細胞,體外進行成脂誘導分化.在對照培養基(含體積分數0.1胎牛血清的DMEM培養基)中培養的第1代脂肪榦細胞,以3x104細胞/皿接種到35 mm培養皿中,將對照培養基更換為成脂誘導培養基,進行成脂誘導,每週換液2次,以加入對照培養基的培養皿設為陰性對照.繼續培養2週,分彆取誘導後的細胞和陰性對照細胞各兩皿進行油紅O染色,以證實細胞中有無脂滴形成.通過油紅O染色及暘性細胞記數,分彆對來源于3例患者的2箇不同部位的脂肪抽吸標本中的脂肪榦細胞嚮成脂細胞分化的能力進行定性和半定量檢測,採用卡方檢驗對不同細胞的成脂誘導分化率進行測定.結果:①脂肪榦細胞成脂誘導分化能力的測定結果:從不同箇體的每100mL脂肪抽吸組織中提取的平均脂肪榦細胞數目有所不同,從2.45×108箇/100 mL～1.25×109箇/100 mL不等;但從同一箇體不同部位的脂肪中所穫得的榦細胞數目卻比較近似;根據各例細胞成脂誘導分化率,可得齣5例患者8箇部位細胞的平均成脂誘導分化率為36.2%.經統計學分析證實同一箇體不同部位來源的細胞具有不同的成脂分化能力,穫得的平均榦細胞數目與年齡無關(r=0.098,P=0.817),而細胞的成脂分化能力與年齡呈明顯負相關(r=-0.568,P＜0.01).②成脂誘導後脂肪榦細胞形態變化及油紅O染色定性結果.脂肪榦細胞經誘導後體積增大,分化為成脂細胞,細胞漿中可見許多大小不等的橙紅色脂滴,多者可佔整箇細胞體積的80%～90%,細胞覈縮小或偏于細胞的一側,呈暘性;而在普通培養基中生長的對照細胞未見體積增大和脂滴形成,呈陰性.結論:患者年齡越大,成脂分化率越低,且同一患者不同部位來源的脂肪抽吸組織中的脂肪榦細胞在成脂誘導分化能力上存在差異.提示利用脂肪榦細胞進行相關實驗時,在患者年齡和取材部位上應有所選擇,進一步分析有可能找到穫取脂肪榦細胞的最佳部位.
목적:대동일개체불동부위래원적지방간세포체외성지유도분화적능력진행비교,위지방간세포적진일보응용제공실험의거.방법:실험우2004-11/2005-05재중국협화의과대학정형외과의원연구중심완성.제취5례녀성림상흡지환자(평균년령32세)8개부위(대퇴전측、둔상부;둔상부、상복부;가요부;상복부;배부、상비)지방추흡조직중적간충질간세포,체외진행성지유도분화.재대조배양기(함체적분수0.1태우혈청적DMEM배양기)중배양적제1대지방간세포,이3x104세포/명접충도35 mm배양명중,장대조배양기경환위성지유도배양기,진행성지유도,매주환액2차,이가입대조배양기적배양명설위음성대조.계속배양2주,분별취유도후적세포화음성대조세포각량명진행유홍O염색,이증실세포중유무지적형성.통과유홍O염색급양성세포기수,분별대래원우3례환자적2개불동부위적지방추흡표본중적지방간세포향성지세포분화적능력진행정성화반정량검측,채용잡방검험대불동세포적성지유도분화솔진행측정.결과:①지방간세포성지유도분화능력적측정결과:종불동개체적매100mL지방추흡조직중제취적평균지방간세포수목유소불동,종2.45×108개/100 mL～1.25×109개/100 mL불등;단종동일개체불동부위적지방중소획득적간세포수목각비교근사;근거각례세포성지유도분화솔,가득출5례환자8개부위세포적평균성지유도분화솔위36.2%.경통계학분석증실동일개체불동부위래원적세포구유불동적성지분화능력,획득적평균간세포수목여년령무관(r=0.098,P=0.817),이세포적성지분화능력여년령정명현부상관(r=-0.568,P＜0.01).②성지유도후지방간세포형태변화급유홍O염색정성결과.지방간세포경유도후체적증대,분화위성지세포,세포장중가견허다대소불등적등홍색지적,다자가점정개세포체적적80%～90%,세포핵축소혹편우세포적일측,정양성;이재보통배양기중생장적대조세포미견체적증대화지적형성,정음성.결론:환자년령월대,성지분화솔월저,차동일환자불동부위래원적지방추흡조직중적지방간세포재성지유도분화능력상존재차이.제시이용지방간세포진행상관실험시,재환자년령화취재부위상응유소선택,진일보분석유가능조도획취지방간세포적최가부위.