中国临床康复
中國臨床康複
중국림상강복
CHINESE JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATION
2006年
34期
82-85,插图34-2
,共5页
赵敬湘%杨丽平%王韫芳%秦立蓬%白慈贤%施双双%南雪%裴雪涛
趙敬湘%楊麗平%王韞芳%秦立蓬%白慈賢%施雙雙%南雪%裴雪濤
조경상%양려평%왕운방%진립봉%백자현%시쌍쌍%남설%배설도
脑肿瘤%神经胶质瘤%明胶酶类%免疫组织化学
腦腫瘤%神經膠質瘤%明膠酶類%免疫組織化學
뇌종류%신경효질류%명효매류%면역조직화학
目的:通过观察脑胶质瘤大鼠动物模型中明胶酶的活性变化,为以明胶酶为靶点的脑胶质瘤治疗奠定实验基础.方法:实验于2004-10/2005-12在解放军军事医学科学院野战输血研究所干细胞生物学研究室完成.9L大鼠胶质瘤细胞购自广州南方医科大学.①选取清洁级健康成年雄性Fisher344大鼠27只,24只建立大鼠脑胶质瘤模型,造模后随机数字表法分为建模后7,14,21,28 d组,6只/组,每组3只用于灌注固定做免疫组化分析,另3只用于反转录多聚酶链反应和明胶酶谱分析.剩余3只大鼠作为正常对照.②采用反转录多聚酶链反应技术、免疫组织化学和明胶酶谱等方法检测胶质瘤中明胶酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)和明胶酶9(matrix metalloproteinase 2,MMP-9)的活性变化.结果:实验选取清洁级健康成年雄性Fisher344大鼠27只,全部进入结果分析.①MMP-2和MMP-9 mRNA的表达:9L胶质瘤细胞中均可见MMP-2和MMP-9 mRNA的表达,MMP-2的表达量高于MMP-9;大鼠脑胶质瘤组织中可见两者mRNA的表达,而正常脑组织MMP-2 mRNA低表达,检测不到MMP-9 mRNA的表达;随着肿瘤的生长,MMP-9mRNA的表达量增高.②MMP-2和MMP-9免疫组织化学观察结果:9L胶质瘤细胞的免疫组化显示,MMP-2和MMP-9均呈现阳性染色,主要为胞浆和胞膜染色;肿瘤组织MMP-2和MMp-9染色阳性,为胞浆染色,在血管内皮和肿瘤侵袭边缘细胞胞阳性染色明显.随脑胶质瘤的生长,MMP-2和MMP-9染色程度加深.③MMP-2和MMP-9酶活性检测结果:9L细胞无血清培养上清中可见Pro-MMP2(Mr72000)与ProMMP9(Mr92000)及其活化形式active MMP-2(Mr66000)与activeMMP-9(Mr83 000)的表达,MMB-2的表达量较高;MMP-2酶原与活化的MMP-2在脑胶质瘤组织中明显表达,而在正常脑组织低表达.MMP-9酶原与活化的MMP-9在脑肿瘤组织中表达,正常脑组织中未检测到其表达.④MMP-2和MMP-9在肿瘤组织中的定位情况:脑胶质瘤组织冰冻切片原位明胶酶谱结果显示,肿瘤组织因表达活性的明胶酶降解载片上的明胶,致使不被染色,肿瘤部位很透亮.对侧脑组织因不表达明胶酶,不能降解明胶,被染黑.结论:脑胶质瘤模型中表达高活性的MMP-2和MMP-9,且与胶质瘤生长速度密切相关.
目的:通過觀察腦膠質瘤大鼠動物模型中明膠酶的活性變化,為以明膠酶為靶點的腦膠質瘤治療奠定實驗基礎.方法:實驗于2004-10/2005-12在解放軍軍事醫學科學院野戰輸血研究所榦細胞生物學研究室完成.9L大鼠膠質瘤細胞購自廣州南方醫科大學.①選取清潔級健康成年雄性Fisher344大鼠27隻,24隻建立大鼠腦膠質瘤模型,造模後隨機數字錶法分為建模後7,14,21,28 d組,6隻/組,每組3隻用于灌註固定做免疫組化分析,另3隻用于反轉錄多聚酶鏈反應和明膠酶譜分析.剩餘3隻大鼠作為正常對照.②採用反轉錄多聚酶鏈反應技術、免疫組織化學和明膠酶譜等方法檢測膠質瘤中明膠酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)和明膠酶9(matrix metalloproteinase 2,MMP-9)的活性變化.結果:實驗選取清潔級健康成年雄性Fisher344大鼠27隻,全部進入結果分析.①MMP-2和MMP-9 mRNA的錶達:9L膠質瘤細胞中均可見MMP-2和MMP-9 mRNA的錶達,MMP-2的錶達量高于MMP-9;大鼠腦膠質瘤組織中可見兩者mRNA的錶達,而正常腦組織MMP-2 mRNA低錶達,檢測不到MMP-9 mRNA的錶達;隨著腫瘤的生長,MMP-9mRNA的錶達量增高.②MMP-2和MMP-9免疫組織化學觀察結果:9L膠質瘤細胞的免疫組化顯示,MMP-2和MMP-9均呈現暘性染色,主要為胞漿和胞膜染色;腫瘤組織MMP-2和MMp-9染色暘性,為胞漿染色,在血管內皮和腫瘤侵襲邊緣細胞胞暘性染色明顯.隨腦膠質瘤的生長,MMP-2和MMP-9染色程度加深.③MMP-2和MMP-9酶活性檢測結果:9L細胞無血清培養上清中可見Pro-MMP2(Mr72000)與ProMMP9(Mr92000)及其活化形式active MMP-2(Mr66000)與activeMMP-9(Mr83 000)的錶達,MMB-2的錶達量較高;MMP-2酶原與活化的MMP-2在腦膠質瘤組織中明顯錶達,而在正常腦組織低錶達.MMP-9酶原與活化的MMP-9在腦腫瘤組織中錶達,正常腦組織中未檢測到其錶達.④MMP-2和MMP-9在腫瘤組織中的定位情況:腦膠質瘤組織冰凍切片原位明膠酶譜結果顯示,腫瘤組織因錶達活性的明膠酶降解載片上的明膠,緻使不被染色,腫瘤部位很透亮.對側腦組織因不錶達明膠酶,不能降解明膠,被染黑.結論:腦膠質瘤模型中錶達高活性的MMP-2和MMP-9,且與膠質瘤生長速度密切相關.
목적:통과관찰뇌효질류대서동물모형중명효매적활성변화,위이명효매위파점적뇌효질류치료전정실험기출.방법:실험우2004-10/2005-12재해방군군사의학과학원야전수혈연구소간세포생물학연구실완성.9L대서효질류세포구자엄주남방의과대학.①선취청길급건강성년웅성Fisher344대서27지,24지건립대서뇌효질류모형,조모후수궤수자표법분위건모후7,14,21,28 d조,6지/조,매조3지용우관주고정주면역조화분석,령3지용우반전록다취매련반응화명효매보분석.잉여3지대서작위정상대조.②채용반전록다취매련반응기술、면역조직화학화명효매보등방법검측효질류중명효매2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)화명효매9(matrix metalloproteinase 2,MMP-9)적활성변화.결과:실험선취청길급건강성년웅성Fisher344대서27지,전부진입결과분석.①MMP-2화MMP-9 mRNA적표체:9L효질류세포중균가견MMP-2화MMP-9 mRNA적표체,MMP-2적표체량고우MMP-9;대서뇌효질류조직중가견량자mRNA적표체,이정상뇌조직MMP-2 mRNA저표체,검측불도MMP-9 mRNA적표체;수착종류적생장,MMP-9mRNA적표체량증고.②MMP-2화MMP-9면역조직화학관찰결과:9L효질류세포적면역조화현시,MMP-2화MMP-9균정현양성염색,주요위포장화포막염색;종류조직MMP-2화MMp-9염색양성,위포장염색,재혈관내피화종류침습변연세포포양성염색명현.수뇌효질류적생장,MMP-2화MMP-9염색정도가심.③MMP-2화MMP-9매활성검측결과:9L세포무혈청배양상청중가견Pro-MMP2(Mr72000)여ProMMP9(Mr92000)급기활화형식active MMP-2(Mr66000)여activeMMP-9(Mr83 000)적표체,MMB-2적표체량교고;MMP-2매원여활화적MMP-2재뇌효질류조직중명현표체,이재정상뇌조직저표체.MMP-9매원여활화적MMP-9재뇌종류조직중표체,정상뇌조직중미검측도기표체.④MMP-2화MMP-9재종류조직중적정위정황:뇌효질류조직빙동절편원위명효매보결과현시,종류조직인표체활성적명효매강해재편상적명효,치사불피염색,종류부위흔투량.대측뇌조직인불표체명효매,불능강해명효,피염흑.결론:뇌효질류모형중표체고활성적MMP-2화MMP-9,차여효질류생장속도밀절상관.
